【摘 要】
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目的:以Balb/c小鼠评价重组杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani,L.d)延伸因子1-α(Elongation factor 1-α,rEF 1-α)、β-微管蛋白(rβ-tubulin)及rH1463201的免疫刺激效应
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目的:以Balb/c小鼠评价重组杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani,L.d)延伸因子1-α(Elongation factor 1-α,rEF 1-α)、β-微管蛋白(rβ-tubulin)及rH1463201的免疫刺激效应及诱导免疫应答类型。方法:1.以PCR方法从杜氏利什曼原虫四川人分离株(MHOM/CN/92/SC10H2)基因组中扩增EF 1-α、β-tubulin、H1463201基因组DNA,DNA测序鉴定后,分别克隆入pQE30质粒载体。将各重组质粒转化工程菌大肠杆菌M15,IPTG诱导后,Ni~+-NTA柱亲和层析纯化重组蛋白。2.将各重组蛋白用作抗原免疫Balb/c小鼠,制备抗血清。3.Western Blot法识别各抗血清的特异性,ELISA法测定各抗血清的效价及IgG亚型。4.分离免疫后小鼠脾细胞,体外经相应抗原再次刺激后,ELISA法检测IL-4、IL-12、IFN-γ等细胞因子水平变化。结果:重组质粒pQE30-EF 1-α、pQE30-β-tubulin与pQE30-H146321均能以包涵体形式表达目的蛋白,分子量与理论值一致。三种重组蛋白rEF 1-α、rβ-tubulin与rH1463201免疫小鼠后,所获得的抗血清均具有特异性,其效价分别为1:800、1:1600、1:1600。抗rEF 1-α血清与抗rH1463201血清所含IgG1亚型水平高于IgG2a亚型(P<0.05),而抗rβ-tubulin血清中IgG1亚型与IgG2a亚型水平无差异(P>0.05)。rEF 1-α、rβ-tubulin与rH1463201免疫小鼠的脾细胞经相应抗原再次刺激后,其IL-4产量分别为12.05±2.135 pg/mL、109.34±9.279 pg/mL、112.01±10.326 pg/mL,均高于PBS对照组(P<0.05),而IL-12、IFN-γ与PBS对照组无差异。结论:成功重组表达了杜氏利什曼原虫rEF 1-α、rβ-tubulin与rH1463201,三种重组蛋白均诱导Balb/c小鼠Th2型免疫应答。
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