酶法水解拆分4-氯-3-羟基丁酸乙酯的研究

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手性的4-氯-3-羟基丁酸乙酯(CHBE)是重要的医药中间体,(R)-CHBE可用于合成L-肉碱,(S)-CHBE是合成他汀类药物——羟甲基戊二酰CoA(HMG-CoA)还原酶抑制剂的关键手性中间体。手性纯CHBE的制备方法主要有以下三种方法:手性钌铑催化剂不对称还原、微生物选择性还原、酶催化拆分外消旋CHBE。其中酶催化拆分外消旋CHBE包括脂肪酶催化的氨解反应和转酯反应以及脱卤酶催化的脱卤环合反应。本文研究了用休眠细胞水解拆分外消旋CHBE。其反应方程式如下:通过对实验室现有菌株进行筛选,得到一株选择性和酶活力都较高的菌株M2,经16S rDNA测序,初步鉴定为苏云金芽胞杆菌,暂命名为Bacillus thuringiensis M2。随后对苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis M2的发酵产酶条件进行了优化,确定适宜的培养基组成为:蔗糖0.5%,葡萄糖1.0%,蛋白胨1.5%,酵母膏1.5%,K2HPO40.2%,MgSO40.1%,NaCl0.5%,初始pH值自然。较佳产酶条件为:培养温度30℃,初始pH6.5,装液量为70ml,摇床转速180rpm。经优化后发酵酶活力从开始的35.83U/L上升到71.33U/L,提高了99.1%。对Bacillus thuringiensis M2菌体催化CHBE水解的反应条件进行了研究。确定较佳的反应条件为:0.2 mol/L,pH7.0的磷酸缓冲液、底物添加量0.18 mol/L、菌体添加量6g/L,32℃。在此条件下反应20小时,转化率和ees分别为57.7%和92.9%。
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