海绵来源细菌的多样性及抗菌活性和功能基因的筛选

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海绵是底栖无脊椎动物,体内富集了大量的微生物。海绵是活性天然产物的重要来源,几乎一半的海洋来源的活性化合物来自于海绵;已经从海绵中分离到近千种化合物,它们很多具有生物活性如抗细菌、抗真菌、抗肿瘤、抗炎症等。威海地处我国北温带的黄海海域,与热带海域相比在海绵种类、体内的微生物和天然产物方面存在一定的差异。因此对威海海域海绵来源微生物及其活性物质的研究可以为海洋微生物资源的利用和新天然产物的发现提供研究基础。本研究采用纯培养法对威海海域的海绵来源细菌进行分离;并进行基于16S rRNA序列的系统发育分析。采用纸片法对海绵来源细菌进行7种指示菌的抗菌活性筛选。对已进行16S rRNA序列测定的菌株进行聚酮合酶(Polyketide synthases,PKS)基因和非核糖体肽合成酶(Non-ribosomal peptide synthetases,NRPS)基因进行筛选。从海绵中共分离到151株细菌(包括35株放线菌,116株非放线菌细菌)。选取形态不同的52株细菌进行基于16S rRNA序列的测定。系统发育分析结果表明,这些细菌属于4个门中的16个科20个属,分别是放线菌门、变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门。放线菌门有9个属,除了优势属链霉菌属(Streptomyces)外,还有8个稀有放线菌属。厚壁菌门有3个属,优势属为芽孢杆菌属(Bacillus);变形菌门有6个属,优势属为弧菌属(Vibrio);拟杆菌门包括2个属。在151株细菌中有94株细菌至少对1种指示菌具有抑制作用,其中有35株细菌对2种指示菌有抑制作用,有22株细菌对3种指示菌有抑制作用,各有1株细菌可同时对4种以及5种指示菌有抑制作用。在对52株细菌进行的PKS基因及NRPS基因筛选中,有6株菌具有PKS基因,有11株菌具有NRPS基因,其中有3株菌同时具有PKS与NRPS基因。结果表明,海绵来源的可培养细菌多样性丰富和具有较好的抗菌活性,可作为发现新的生物活性物质的潜在来源。
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