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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种高度接触性传染病,以母猪繁殖障碍和仔猪的呼吸道疾病为主要特征。该病在几乎在所有的国家流行,严重影响养猪业的发展。近年来每年7-10月份安徽省部分猪场流行反复发热、呼吸道症状为主的疾病。呼吸道症状是PRRS的另一个显著特征,可发生于养猪生产周期的大多数阶段。为了了解安徽省部分猪场PRRS发病情况,本研究利用间接ELISA方法,对未进行PRRSV免疫接种的安徽省部分猪场的377份猪血清进行PRRS的抗体检测。以诊断PRRS的自然感染。结果在377份猪血清样品中共检出阳性121份,平均检出率为32.1%。结果表明,这些被调查的猪场存在PRRS的自然感染。本文并分析了感染猪与发病日龄、品种和地区分布的关系。根据PRRSV美洲型标准株(ATCCVR-2332)的核衣壳蛋白基因(N基因)的ORF7保守序列,设计了扩增片段为432bp的一对特异引物,分别对2006.06-2008.07采自安徽省合肥、安庆、六安、淮北和马鞍山5个地区的51份临床病料进行检测,结果37份为阳性,检出率为72.5%;再用购自IDEXX公司的PRRS检测试剂盒(NSP2 1594-1680)对上述37份阳性病料,进行变异株检测;结果检出22份变异株,检出率为59.5%。结果表明PRRS在所检测的5个地区的检出率均较高;且当前安徽省猪群中PRRSV的感染以变异株为主。参照Genbank上发表的PRRSV毒株的ORF5基因序列,针对该片段基因设计了扩增片段为603bp的一对特异性引物,并对其中的六个变异株进行ORF5基因扩增。对其中6株安徽省PRRSV ORF5阳性目的条带,分别命名为AH/MAS、AH/HF、AH/CZ、AH/WH、AH/TC、AH/HN;将扩增得到的PCR产物纯化后分别连接到PMD18-T载体上,转化到大肠杆菌DH5α中,增菌培养后,挑选阳性克隆,进行序列测序。应用DNAStar软件分析6个测序株的ORF5基因的核苷酸序列,并与疫苗株(JXA1),国内分离毒株(CH-1a、SX-1603、HB-4)、美国株(PRRSV0000003158、PRSV0000003748)、欧洲株(EuroPRRSV)和韩国株(PL97-1LP1WSV)等毒株的核苷酸序列进行比较。分析显示:这6个测序株均属于PRRSV的北美洲型毒株,且属于两个不同的亚群。6个测序毒株之间核苷酸同源性为86.1%-99.3%;与美国株核苷酸的同源性分别为89.7%-94.4%、88.4%-93.7%;与韩国株核苷酸同源性为86.1%-99.3%;与国内其它省份的分离株核苷酸同源性为85.7%-99.8%;与欧洲株的核苷酸同源性为60.0%-63.8%:对6个测序株的GP5蛋白的抗原表位分析表明,安徽测序株间存在着抗原性变异。综上所述,在安徽部分猪场无论采用血清学抗体检测,诊断PRRS的自然感染;还是应用RT-PCR检测PRRSV核酸RNA的方法,都证明猪体内有PRRSV,这些研究都证实了PRRS在安徽不同地区普遍存在。初步掌握PRRS在安徽地区猪群中的感染及流行情况。PRRSV易于变异的特性一直受到各国研究者的关注。不同地域PRRSVORF5同源性分析表明,安徽测序株之间存在着较大变异。这对阐明近几年安徽地区PRRSV的来源、分子特征和遗传演化具有重要意义。分析安徽流行株的特点以及安徽毒株与目前国内发生的PRRSV是否存在一定的关系。同时对PRRSV的ORF5基因的变异性进行研究和GP5蛋白的抗原性比较分析,这为今后疫苗的研制方向提供了一定的理论参考。