论文部分内容阅读
【目的】通过培养血管瘤内皮细胞,建立血管瘤小鼠模型,给予普萘洛尔凝胶外涂干预,探讨普萘洛尔凝胶抑制血管瘤生长的有效性,为普萘洛尔凝胶治疗婴幼儿血管瘤提供理论依据。【方法】手术切取增殖期草莓状婴幼儿血管瘤新鲜组织标本,用原代组织块培养法结合酶消化法培养血管瘤内皮细胞,细胞免疫组化鉴定血管瘤内皮细胞CD31、CD34、第Ⅷ凝血因子相关抗原的表达,流式细胞仪检测血管瘤内皮细胞CD31抗原表达情况,进一步验证血管瘤内皮细胞纯度;将培养的血管瘤内皮细胞制成细胞悬浮液使其密度为1×107/个/ml,同基质胶3:2混合成500μl注射于Balb c/nu nu裸鼠皮下,注射后第3、5天分别追加注射一次1×107/个/ml,200μl细胞悬浮液;共20只,对照组和实验组,每组10只,另有正常裸鼠10只,实验组于注射后第15天,正常组于等同时间,给予3%普萘洛尔凝胶外涂注射部位,3次/d,对照组不进行任何处理;定期记录、观察瘤体的生长情况,比较两组间瘤体的生长差别,观察涂药部位裸鼠皮肤有无溃烂、出血、破损,对比两组裸鼠体重变化,分别于细胞注射第45d处死各组裸鼠,取血以高效液相色谱荧光检测法血药浓度,切取瘤体组织行HE染色和免疫组化,比较两组之间组织病理差别。【结果】1.原代组织块培养第3d,内皮细胞放射游离出组织块,第16d铺满瓶底;2.培养的细胞CD31、CD34、第Ⅷ凝血因子相关抗原呈阳性表达;3.流失细胞仪检测细胞的纯度为99.47%;4.实验组瘤体生长缓慢,30d左右瘤体消失,涂药部位皮肤无出血、破溃、破损;5.对照组细胞注射后第15d瘤体缓慢增大,45d左右瘤体达最大;6.瘤体组织经HE染色后可见有大量的血管生成,免疫组化证实为人体来源的血管瘤。【结论】1.可成功培养出血管瘤内皮细胞;2.血管瘤内皮细胞同基质胶混合可成功建立裸鼠血管瘤模型;3.普萘洛尔凝胶抑制血管瘤的生长;4.外涂普萘洛尔凝胶有效,无明显不良反应出现。