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背景和目的：甲状腺癌的发病率逐年上升,包括:乳头状癌、滤泡状癌、未分化癌和髓样癌。尽管分化良好的甲状腺癌占甲状腺癌患者的90%以上,但甲状腺癌转移的发生率却非常高,20%-90%的甲状腺乳头状癌患者在首次确诊时已发生局部淋巴结转移,严重影响了疾病的预后[3]。目前,甲状腺癌转移的分子机制尚不明确,研究甲状腺癌转移的分子机制对于寻找甲状腺癌新的治疗靶点具有重要的理论和实际意义。基质细胞衍生因子-1(SDF-1)是趋化因子蛋白家族主要成员之一,广泛的表达于各种组织和细胞中。CXC族趋化因子受体4(CXCR4)是G蛋白偶联受体家族的一员,是SDF-1的主要受体之一,SDF-1/CXCR4系统在肿瘤的发生、转移过程中发挥重要作用。CXCR4在正常的甲状腺细胞和多数良性的甲状腺瘤细胞中低或不表达,而在甲状腺癌细胞中高表达CXCR4[6,7]。CXCR4受体密度的增加,可增强SDF-1引起的细胞侵袭活动,但对癌细胞增殖没有影响[8]。提示SDF-1/CXC R4系统可能在甲状腺癌细胞的迁移侵袭过程中发挥重要作用。本课题的目的是在细胞模型中研究SDF-1/CXCR4系统调节甲状腺乳头状癌细胞迁移、侵袭的作用及相关分子机制。材料和方法:1.材料82例人甲状腺乳头状癌组织为吉林大学中日联谊医院2014年12月至2016年5月手术切除标本;B-CPAP购于上海中乔新舟生物科技公司。2.方法(1)免疫组化检测人甲状腺乳头状癌组织标本中CXCR4的表达。(2)体外培养人甲状腺乳头状癌细胞株(B-CPAP)。设计并合成CXCR4基因CDS区,构建CXCR4过表达的质粒。B-CPAP细胞转染CXCR4过表达质粒或对应的vector(空载质粒),瞬转获得B-CPAP-vector和B-CPAP-CXCR4细胞。转染48小时后,免疫印迹和荧光定量实验检测各组细胞中CXCR4的表达水平。(3)在B-CPAP细胞中转染CXCR4过表达质粒24小时后,用100ng/ml的SDF-1处理48小时。然后通过划痕实验检测各组细胞迁移能力;通过Transwel l实验检测各组细胞侵袭能力。(4)在B-CPAP细胞中转染CXCR4过表达质粒24小时后,用100ng/ml的SDF-1处理48小时。然后免疫印迹检测E-cadherin(上皮-钙黏素),N-cadhe rin(神经-钙黏素),Vimentin(波形蛋白),NF-κB,磷酸化的IκB(P-IκB)以及细胞核内NF-κB的表达水平。免疫荧光实验检测E-cadherin的表达情况。(5)在B-CPAP细胞中转染CXCR4过表达质粒24小时后,用5μmol NF-κB抑制剂BAY11-7028(BAY)预处理1小时,然后加入100ng/ml的SDF-1处理48小时。免疫印迹实验检测NF-κB、P-IκB以及细胞核内NF-κB的水平;划痕实验检测各组细胞迁移能力;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。结果:(1)免疫组化检测结果显示CXCR4在甲状腺乳头状癌组织中高表达(2)免疫印迹和荧光定量检测结果显示转染CXCR4过表达质粒后,B-CPA P-CXCR4细胞中CXCR4表达明显增加。(3)在B-CPAP细胞中转染CXCR4过表达质粒后,用SDF-1处理,细胞的迁移性和侵袭性显著增强。(4)SDF-1/CXCR4明显减少了E-cadherin蛋白表达量,增加了N-cadhe rin蛋白、Vimentin蛋白的表达量。免疫荧光检测E-cadherin蛋白发现,SDF-1/CXCR4系统可以明显抑制E-cadherin的表达量。表明SDF-1/CXCR4系统促进B-CPAP的EMT过程。(5)SDF-1/CXCR4系统可以显著性提高细胞核中NF-κB的表达量,降低细胞质中NF-κB的表达量,降低细胞中P-IκB的表达量,激活NF-κB信号通路。(6)免疫印迹实验表明NF-κB抑制剂BAY可以提高E-cadherin表达量,降低N-cadherin、Vimentin表达量,抑制了SDF-1/CXCR4系统对B-CPAP的EM T过程的促进作用;划痕实验表明NF-κB抑制剂BAY可以减弱SDF-1/CXCR4系统对B-CPAP迁移能力的促进作用;Transwell实验表明NF-κB抑制剂BAY可以减弱SDF-1/CXCR4系统对B-CPAP侵袭能力的促进作用。结论:(1)CXCR4受体反应系统可加强NF-κB通路的信号传导,促进甲状腺乳头状癌细胞的EMT过程,加强乳头状癌细胞的迁移侵袭。(2)NF-κB通路的抑制剂BAY可削弱CXCR4受体反应系统对甲状腺乳头状癌细胞EMT过程的促进作用,减轻CXCR4受体反应系统对甲状腺乳头状癌细胞的促迁移侵袭作用。NF-κB通路可望成为抑制甲状腺乳头状癌细胞迁移侵袭的潜在治疗靶点。