论文部分内容阅读
目的:通过检测FGL1在肺腺癌及癌旁组织中的表达差异,观察改变FGL1表达水平对肺腺癌细胞放射敏感性的影响并研究其机制,为提高肺腺癌放射敏感性提供新的靶点。研究方法:利用The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据在线分析工具GEPIA分析FGL1在人肺腺癌中的表达情况。选取在中国医科大学附属第一医院胸外科手术的肺腺癌患者的癌和癌旁组织标本,通过Western Blot实验检测FGL1蛋白在肺腺癌组织和正常组织中的表达差异;Real-time PCR实验检测FGL1 m RNA在肺腺癌组织和正常组织中的表达差异。Western Blot实验检测五种常见人类肺腺癌细胞系中FGL1蛋白表达量的高低,从中选择FGL1表达量较高的两组细胞系进行后续实验。在人类肺腺癌细胞系中转染FGL1沉默质粒shRNA#1和shRNA#2,以及FGL1沉默对照质粒NC-shRNA;通过克隆形成实验检测沉默FGL1表达对肺腺癌细胞放射敏感性的影响;通过流式细胞仪检测FGL1表达沉默对肺腺癌细胞G2/M期阻滞情况。结果:1.TCGA数据在线分析工具GEPIA的统计分析结果显示FGL1在肺腺癌中的表达显著高于正常组织,差异具有统计学意义（P<0.05）。2.Western Blot实验检测24对肺腺癌癌与癌旁组织中FGL1蛋白表达差异,结果显示,有21对肺腺癌组织的FGL1蛋白的表达量比癌旁组织高,差异具有统计学意义（P<0.0001）。3.Real-time PCR实验检测24对肺腺癌癌与癌旁组织中FGL1 m RNA表达差异,结果显示,有16对肺腺癌组织中的FGL1 m RNA的表达量比癌旁组织高,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.Western Blot实验检测质粒转染后的FGL1沉默效率,结果显示,与FGL1沉默对照组质粒NC-shRNA相比,FGL1沉默组质粒shRNA#1和shRNA#2明显降低了人肺腺癌A549和H1299细胞系中FGL1蛋白的表达,差异具有统计学意义（A549,P<0.05;H1299,P<0.01和P<0.05）。5.Real-time PCR实验检测质粒转染后的FGL1沉默效率,结果显示,与FGL1沉默对照组质粒NC-shRNA相比,FGL1沉默组质粒shRNA#1和shRNA#2明显降低了人肺腺癌A549和H1299细胞系中FGL1 mRNA的表达,差异具有统计学意义（A549,P<0.01和P<0.001;H1299,P<0.001和P<0.01）。6.克隆形成实验结果显示,转染了FGL1沉默组质粒shRNA#1和shRNA#2的A549和H1299细胞的D0,Dq,SF2值均低于FGL1沉默对照组质粒NC-shRNA转染的A549和H1299细胞,且SER值均大于1。7.流式细胞仪检测A549和H1299细胞系的细胞周期,结果显示沉默FGL1表达及沉默FGL1表达联合照射均显著增加G2/M期阻滞,差异具有统计学意义（P<0.05和P<0.01）。结论:本研究的实验结果证明了FGL1基因在肺腺癌组织中表达上调,沉默肺腺癌细胞中FGL1的表达可以增加肺腺癌细胞的放射敏感性。其机制可能是沉默FGL1表达导致肺腺癌细胞周期中G2/M期的阻滞,从而提高肺腺癌细胞的放射敏感性。本研究结果可能为提高肺腺癌的放射治疗疗效提供新的思路。