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本论文研究了微藻多不饱和脂肪酸的生理生化过程,探讨了EPA的制备及其抗肿瘤活性,全文由以下五部分组成:
第一部分,探讨了植物激素对微藻的生长和脂肪酸组成的影响。吲哚乙酸IAA和赤霉素GA对几种海洋微藻的生长没有促进作用,高浓度时具有抑制作用。对球等鞭金藻3011而言,IAA浓度为0.1和0.5mg/L时多不饱和脂肪酸含量增加,尤其DHA含量增加显著。
第二部分,首次探讨了Sr2+胁迫对微藻生长、抗氧化酶、脂肪酸组成的影响以及微藻对锶的富集能力,发现亚心形扁藻1030和叉鞭金藻3009对Sr2+胁迫具有较高的耐受能力。实验结果表明:在实验设计的各种Sr2+浓度内1030和3009均能生长,但当Sr2+浓度大于5.76mmol/L时生长受到不同程度的抑制。1030的叶绿素含量随着Sr2+浓度的升高而降低,呈负相关关系,而3009则相反。1030在无Sr2+时蛋白质含量最高,0.09mmol/L时蛋白质含量最低,随着Sr2+浓度的增加逐渐升高;对3009而言,低Sr2+浓度时蛋白质含量稍微增加,当Sr2+浓度超过5.76mmol/L时则引起蛋白质含量下降。1030的MDA含量随Sr2+浓度的升高而升高,当Sr2+浓度大于5.76mmol/L后急剧降低;3009的MDA含量在Sr2+浓度小于1.44mmol/L时稍呈下降趋势,但与对照组相比并无显著差异,而在23.04mmol/LSr2+浓度时是对照的1.23倍。1030的SOD活性在Sr2+存在时始终维持一个较高的水平,且随Sr2+浓度的增高而先升高后降低;3009的抗氧化酶SOD,CAT,GPX活性在低Sr2+浓度时差别不大,但当浓度为23.04mmol/L时升高显著。GSH含量在11.52mmol/L和23.04mmol/L时分别增加5.2%和100%。1030的脂肪酸种类随着Sr2+浓度的升高而减少,且表现出对Sr2+的高富集能力。
第三部分,探讨了不同氮浓度对微藻生长和脂肪酸组成的影响。较高浓度的NaNO3对亚心形扁藻1030的生长具有促进作用;其干重,叶绿素和总脂含量都随着NaNO3浓度的升高逐渐增加,并在150和300mg/L浓度时达到最大值;氮浓度对1030脂肪酸组成影响不是很大,在较低的氮浓度下,多不饱和脂肪酸含量增加,饱和脂肪酸含量下降。对绿色巴夫藻3012而言,低氮浓度促进总脂的累积,当氮浓度从6.2mM下降到0mM时,总脂含量从24.83%上升为32%;无氮时,绿色巴夫藻含有较多的饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸,当氮浓度为6.2mM时,EPA含量最高(占总脂肪酸的13.9%)。无氮对球等鞭金藻8701总脂含量的影响不显著,而等鞭金藻3011有氮时总脂含量显著提高;对脂肪酸而言,8701和3011都在无氮时具有较高的饱和脂肪酸含量,有氮时多不饱和脂肪酸的含量增加。
第四部分,选择丙酮-正己烷为洗脱剂,首次用于绿色巴夫藻多不饱和脂肪酸甲酯的分离,探讨了脂肪酸甲酯在硝酸银-硅胶上的层析过程,采用含不同比例丙酮的正己烷为洗脱剂进行不连续梯度洗脱,EPA甲酯在10%(v/v)丙酮正己烷最后部分开始被洗脱,在15%丙酮正己烷洗脱部分中,依次得到纯度为95.29%,96.74%、97.55%、97.74%的EPA甲酯,合并15%丙酮正己烷的洗脱液可获得纯度为98%的EPA甲酯(洗脱得率为60%)。实验还比较了不同提取方法对3012总脂和脂肪酸含量的影响,氯仿-甲醇法可得到较高的总脂含量,平均为20.8%;采用一步法直接甲酯化3012藻粉,可得到较高的不饱和脂肪酸含量。
第五部分,首次将提取分离的高纯度EPA甲酯作用于PC12细胞进行抗肿瘤活性的研究。通过MTT染色,流式细胞技术,末端转移酶标记技术和DNA电泳等来检测EPA甲酯对其的作用和可能的机制。EPA甲酯主要是通过诱导PC12细胞凋亡来抑制其生长,而且这种抑制作用呈现出时间和剂量依赖的关系。