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本课题的目的是研究本公司专利产品rmhG-CSF-Cys176的PEG修饰和纯化工艺,并对PEG修饰rmhG-CSF-Cys176的生物学活性进行分析。具体研究内容包括rmhG-CSF-Cys176发酵液的分离纯化,得到高纯度的rmhG-CSF-Cys176蛋白,然后用该蛋白和聚乙二醇马来酰亚胺基（mPEG-Maleimide,mPEG-Mal）特异性结合,研究修饰反应的条件,获得聚乙二醇修饰产物的混合物,并对混合物进行分离纯化,得到高纯度的PEG-rmhG-CSF-Cys176,并对该修饰蛋白进行生物学特性研究,为PEG-rmhG-CSF-Cys176规模化生产提供实验依据和基础。研究结果发现:1.突变体rmhG-CSF-Cys176的制备与纯化鉴定:对突变体rmhG-CSF-Cys176菌株进行发酵、增溶、复性、HIC疏水层析、Resource S离子交换层析得到RP-HPLC纯度为99.2%,SDS-PAGE纯度为99.0%,高效凝胶过滤纯度为100%的高纯度的rmhG-CSF-Cys176 蛋白。2.rmhG-CSF-Cys176 的 PEG 修饰及纯化:用 rmhG-CSF-Cys176蛋白和聚乙二醇马来酰亚胺基（mPEG-Maleimide,mPEG-Mal）进行修饰反应,研究确定了 PEG修饰rmhG-CSF的最佳条件:用50ml 1mg ·ml-1的 rmhG-CSF-Cys176,100mMBicine（pH6.0）,然后加入 2 倍摩尔比的聚乙二醇马来酰亚胺基（PEG-MAL20000）,在18℃下搅拌反应24h,其转化率达到43%。再通过Resource S离子交换层析对PEG-rmhG-CSF-Cys176等修饰反应混合物进行分离纯化,得到纯度为98.9%的 PEG-rmhG-CSF-Cys176 蛋白。3.PEG-rmhG-CSF-Cys176生物学特性研究:对该修饰蛋白进行生物学特性研究发现:PEG-rmhG-CSF-Cys]76的活性与rhG-CSF活性相当,高于PEG-rhG-CSF（N端）的活性;体内活性实验明显长效,动物实验证实,其体内半衰期延长到了 14.8小时,比未修饰的rhG-CSF（T1/2=2.2小时）提高了 7倍,达到了长效目的。