中国水仙遗传转化及花色素成分分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 17次 | 上传用户:wpe2727
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
中国水仙(Narcissus tazetta var. chinensis)是石蒜科水仙属多年生草本植物,是我国著名的十大传统名花之一,其花清新高雅,造型美观,是冬春重要的时令花卉,深受人们喜爱。但长期以来中国水仙存在花色单一、品种单一等问题,不能满足市场的需求。通过转基因手段对水仙进行品种改良是一条有效的途径。本研究以福建漳州水仙为材料,在以中国水仙花葶为试材建立高效再生体系的基础上,初步研究了中国水仙以花葶作为受体材料的遗传转化体系;并提取了漳州水仙花色素,运用高效液相色谱法(HPLC)分析了花瓣和副冠中色素成分和含量,研究结果为利用基因工程手段培育中国水仙新品种奠定基础。主要研究结果如下:1.花葶取材:中国水仙花葶在11月中下旬花芽分化完成之后才开始伸长生长。12月、1月和2月份的花葶的长度和成熟度不同,且下端与鳞茎相连幼嫩的部位诱导芽的能力强。取12月份花葶1 cm左右,1月份是1-1.5 cm,则2月份的花葶较长可以取1.5 cm左右,将花葶切成1-2 mm薄片作为外植体。2.花葶为外植体高效再生体系的建立:试验对不同时期的花葶直接诱导芽进行了研究,并建立了适合于转基因研究的高效再生体系。比较3个不同时期花葶直接诱导芽的能力;12月份花葶以MS基本培养基附加激素5 mg·L-1 BA、0.3 mg·L-1 NAA诱导不定芽效果较好;1月份花葶以MS+ 5 mg·L-1 BA+ 0.3 mg·L-1 NAA或MS+ 3 mg·L-1 BA+ 0.5 mg·L-1 NAA两种培养基较好;2月份花葶在培养基MS+ 3 mg·L-1 BA+ 0.5 mg·L-1 NAA上不定芽分化较好。三个时期花葶不定芽诱导率都达到90%以上,分化系数达到5以上。研究还发现花葶在接种时需要将形态学上端朝上放置才易诱导出芽。不定芽在MS+ 0.5 mg·L-1 BA+ 0.3 mg·L-1 NAA壮苗培养基上可生长成健壮的小鳞茎。3.花葶为外植体遗传转化初步研究:用农杆菌EHA105/pCMBIA2300-35S-LLFY-OCS对中国水仙进行转化。抑菌剂浓度梯度试验结果显示羧苄青霉素在浓度为300 mg·L-1、头孢霉素在浓度500 mg·L-1时就可以抑制根癌农杆菌的生长;抗生素浓度梯度试验结果表明30 mg·L-1卡那霉素浓度适合于转化后的筛选。对影响转化的因素进行了比较研究,花葶在MS+ 5 mg·L-1 BA+ 0.5mg·L-1 NAA+ 3%蔗糖培养基中预培养6 d后,用OD600值为0.4的农杆菌重悬液浓度侵染30 min,共培养4 d后,转入筛选培养基MS+ 5 mg·L-1 BA+ 0.5 mg·L-1 NAA+ 30 mg·L-1 Kan+ 300 mg·L-1 Carb+ 3%蔗糖进行筛选,能获得较多抗性芽。4.花色素成分分析:对漳州水仙花的白色花瓣和黄色副冠的类胡萝卜素类色素进行提取,采用高效液相色谱法(HPLC)分析成分并测定了其含量。提取液甲醇、乙酸乙酯、石油醚体积比为1: 1: 1混合,在低温条件下可将类胡萝卜素很好的分离。色谱条件为色谱柱Luna(C18)反相柱(5μm 4.6*250 mm),流动相为0-10 min乙腈:甲醇:二氯甲烷= 70: 25: 5,20-30 min为乙腈:甲醇:二氯甲烷= 45: 10: 45。检测波长:445 nm,流速:1.0 ml/min,柱温:25℃。结果表明中国水仙花色素的主要成分是叶黄素和β-胡萝卜素,黄色副冠中叶黄素含量高于β-胡萝卜素,白色花瓣中两种色素含量都很少。
其他文献
目的 研究 DSC在伺服系统中的应用 .方法 由 DSC组成伺服系统检测中的信号发送装置 ,在调试伺服系统时 ,控制伺服系统的运动 .对组成信号发送部分的几个关键技术问题 :DSC
昔日僧人“吃斋”,如今“吃斋”不念佛,追求新时尚,我行我素的食素者与日俱增,连欧美国家也有近1/10的人开始加入到这一行列中来,有的纯粹是生活习惯;有的为了环保、回归自然
适度的压力是有益处的,因为它能帮助你更好的迎接挑战或达到目标;但压力过度会造成慢性疾病,引起情绪和身体上的不适。纽约的一名有氧舞蹈和瑜伽教练蒂娜·弗兰克向人们提供
美国加州大学洛杉矶分校大卫·吉芬医学院人类营养研究中心的七位科学家经过研究后发现:黑莓、黑树莓(也称黑色覆盆子、黑色悬钩子)、蓝莓(也称越橘)、酸果蔓 Seven scienti
格雷格·兰奇瑞是一位运动生理学家和私人教练,多年来他向想减肥的男女成年人、II型糖尿病人、新产代谢速度缓慢和甲状腺机能减退的病人提供了健身指导。经过他多年的健身指
减肥是现代社会人们追求健康和美体的重要手段之一。现今社会,物质文明进步、生活水平提高和饮食结构的改善,人们饮食过多、活动过少,肥胖者日见增多。据有关调查发现:目前我
本试验选用6个抗病性不同的甘蓝型油菜品种,研究其叶表皮蜡质组成及结构与菌核病抗性的关系。结果表明,抗病品种在去除叶表皮蜡质后病情指数显著增加;感病品种无显著变化。不
君子的烦恼rn有个学佛的人总想过清净的生活,但是生活中的烦恼使他无法平静.有天他遇到一位师傅,他问:"为什么我的周围总有小人?大事、小事总和我计较,说这说那使我非常生气,
之前,对有关健康和长寿的经验、体会甚至专家的啼血之告,我多是听之任之,不大以为然。觉得彼有效,此未必尽然。直到那一天,我见到了这位令我惊异不已的老人,才彻底颠覆了我的
出生于1917年的南怀瑾是著名的国学和禅学大师,其学问涵盖儒、释、道、医卜天文、诗词歌赋等.曾一度被名列“台湾十大最有影响的人物”,不少台湾党政、军政要人及工商巨子都