头穴丛刺法调控大鼠脑梗死后内源性神经干细胞增殖迁移分化的研究

来源 :黑龙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yjf11230301
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目的:室管膜下区(SVZ)是目前公认的成年个体神经干细胞最为集中的区域之一。SVz神经干细胞产生的祖细胞是SVZ细胞中最具特色的细胞群,它自产生起即具备发育为神经元的潜能,这使得SVZ神经干细胞成为研究神经干细胞发育的较佳模型。 本实验选用Dil荧光染料预标记大鼠SVZ的原始细胞,后制备局灶性脑缺血模型,经头穴丛刺法治疗后,观察该疗法对SVz的神经干细胞增殖、迁移、分化的影响,以及该疗法对脑缺血后FGF-2和NCAM含量的影响,探讨该疗法通过对局部微环境的调控进而促进成年神经再生,修复和重建神经网络的理论机制。 方法: (1)各组大鼠于立体定位仪上定坐标,将 10μL0.2%的荧光染料Dil注射于体质量250-300g的雄性Wistar大鼠侧脑室以预标记室管膜下区细胞; (2)48h后采用血管内栓线法制备大鼠局灶性脑缺血模型; (3)Bederson神经功能评定方法评定大鼠神经功能缺损程度,评分低于2分者剔除; (4)将造模后符合评分标准的大鼠随机分为模型组、头针组、头穴丛刺法组,每组12只,假手术组4只,各时间点分组相同; (5)各组大鼠取材前,采用脉冲式的BrdU标记方法标记新生细胞; (6)普通光镜观察组织病理形态学的改变; (7)原位杂交法检测FGF-2mRNA和NCAMmRNA的表达; (8)激光共聚焦显微镜检测预标记原始SVZ神经干细胞后,再检测双重免疫荧光染色所确定的分化的细胞。 结果: (1)治疗前各组大鼠神经功能评分,无明显差异,治疗后头穴丛刺法组与模型组比较有极显著性差异,与头针组比较有显著性差异; (2) 头穴丛刺法组HE染色显示,该组24小时时间点多见坏死灶边缘清晰,未见坏死过渡表现,21 天时间点多见梗死灶周围毛细血管垂直长入,神经纤维新生; (3) 头穴丛刺疗法促进了FGF-2mRNA和NCAMmRNA在神经细胞浆、胶质细胞浆以及血管内皮的表达,与其他两组比较有显著性差异; (4)模型组、头针组、头穴丛刺法组均可见Dil标记的室管膜下区细胞迁移至梗死周边的纹状体和皮质,并且分化成神经元或胶质细胞,头穴丛刺法组Dil/BrdU/NeuN或Dil/BrdU/GFAP标记的细胞明显增多,与其它两组比较有显著性差异; (5)头穴丛刺法组BrdU/NeuN及BrdU/GFAP阳性细胞表达均多于其它两组,组间比较有显著性差异。 结论: (1)头穴丛刺法促进局灶性脑缺血后大鼠神经功能康复,神经功能评分有明显改善; (2)头穴丛刺法能使局灶脑缺血后脑组织中FGF-2mRNA及NCAMmRNA表达更高,表达时程更长; (3)头穴丛刺法促进内源性FGF-2及NCAM合成增加可能是促进神经干细胞增殖的一个机制; (4)头穴丛刺法能促进局灶脑缺血后脑组织神经生发中心SVZ区神经干细胞增殖,并且随时间递增减少其增殖衰减; (5)头穴丛刺法可促进Dil标记的室管膜下区细胞均迁移至梗死周边的纹状体和皮质,并且分化成神经元或胶质细胞; (6)头穴丛刺法能促进局灶性脑缺血后室管膜下区神经干细胞的迁移,并且数量更多,同时表达BrdU/NeuN及BrdU/GFAP(即成熟神经元及胶质细胞)的阳性细胞更多,即该法促进了内源性的神经干细胞的分化。
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