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上世纪50年代,为治疗革兰氏阴性菌感染的病例,多粘菌素类药物被应用于临床医学和畜牧业,但由于其神经毒性和肾毒性等原因,上世纪80年代后逐渐被新型抗生素取代。而近年来随着多药耐药革兰氏阴性菌,尤其是耐碳青霉烯肠杆菌的出现,多粘菌素作为“抵抗多药耐药革兰氏阴性菌感染的最后一道防线”,重新引起了人们的重视。自2015年我国学者首次报道了由具有较高接合频率的流行性质粒介导的多粘菌素耐药基因mcr-1后,该基因在动物源大肠杆菌中的检出率逐年升高,且这些耐药菌株的种属呈现多样性。mcr-1位于多种流行性质粒上,这让它能在人、动物和环境中快速、广泛地进行传播。本文将养殖环境中广泛存在的大肠杆菌选作研究对象,从江苏省的两个猪场A和B采集鼻拭子、肛拭子、粪便、土壤、灰尘和水样共六类样品,分离获得mcr-1阳性大肠杆菌83株。采用平板稀释法对这83株阳性菌进行8类共8种抗菌药的药敏试验,而多粘菌素E则采用微量肉汤法进行药敏试验。对这83株阳性菌采用PCR进行其它耐药基因的检测,其中包括:mcr-2、mcr-3、mcr-4、mcr-5,磷霉素类fosA、fosA3、fosC2,碳青霉烯类 blaNDM-1,四环素类tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(D)、tet(M),酰胺醇类.floR,共14种耐药基因,以了解mcr-1阳性大肠杆菌在养殖场内的耐药现状。同时通过PCR对mcr-1传播过程中的优势质粒型进行检测,包括IncI2、IncHI2、IncX4和已经报道存在mcr-1基因的IncN、IncP、IncF质粒型共六类,并对这83株采样分离的阳性菌株是否含有环状中间体ISApl1-mcr-1-pap2进行PCR检测。结合实验室保存的56株mcr-1阳性大肠杆菌,对全部139株阳性菌株进行PFGE试验和接合转移试验以了解菌株的亲缘关系和mcr-1基因的传播机制。体外抑菌活性试验结果表明,猪场分离到的大肠杆菌耐药广泛,且存在水平传播的风险。不同样品中分离到的mcr-1阳性大肠杆菌对除美罗培南外的8类8种药物表现出不同程度的耐药性,对氟苯尼考、阿莫西林耐药率均在94%以上,而两个猪场分离的阳性菌株对链霉素和恩诺沙星的耐药性差异较大,结合多重耐药性结果,猪场A的耐药情况比猪场B更严重。耐药基因PCR检测结果表明,猪场分离菌株的耐药表型和耐药基因型基本一致。PCR检测结果发现了一株同时携带mcr-1基因和介导碳青霉烯类药物耐药的blaNDM-5基因的菌株,但是该菌株对美罗培南低敏感,MIC值仅为1μg/mL,两种基因的同时存在,表明耐碳青霉烯类药物的多药耐药革兰氏阴性菌很有可能同时对多粘菌素类药物具有耐受性。PCR检测优势质粒型结果显示,38株阳性菌具有Incl2型质粒,6株具有IncHI2型质粒,6株具有IncX4型质粒,3株具有IncN型质粒,而环状中间体ISApl1-mcr-1-pap2的PCR检测结果为阴性。阳性菌株的PFGE结果表明,mcr-1基因可以以大肠杆菌为载体进行水平传播和克隆传播,且同一猪场内的mcr-1阳性大肠杆菌呈多样性,这大大提高了mcr-的传播概率,也为mcr-1的变异与进化提供了有利条件。139株mcr-1阳性菌接合转移成功率为34.5%,证明mcr-1基因可以通过优势质粒进行水平传播。