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目的:通过探索Notch信号通路相关分子在新生、成年和衰老等不同年龄段小鼠卵巢组织及卵巢生殖干细胞中的表达及动态变化,阐明Notch信号通路在调控卵巢生殖干细胞增殖、分化和衰老中的作用,为解决卵巢功能早衰及相关疾病的防治问题提供理论依据。方法:1.用免疫组织化学、Real-time PCR方法检测生殖细胞标志物MVH和Notch信号通路分子Notch1,Jagged1,Hes1,Hes5在3日龄,2月龄,20月龄小鼠卵巢上皮中的表达及动态变化。2.用免疫荧光双标组织化学法检测生殖细胞标志物MVH和Notch信号分子Notch1,Jagged1,Hes1在3日龄,2月龄,20月龄小鼠卵巢上皮中的共表达及动态变化。3.以STO细胞做饲养层,用两步酶消化法取3日龄小鼠卵巢分离获得单个卵巢生殖干细胞使用添加了LIF、EGF、bFGF等不同细胞生长因子的干细胞培养液在37℃、5%CO2条件下培养。4.用免疫荧光细胞双标记法检测3日龄小鼠卵巢生殖细胞标志物MVH和Notch信号分子Notch1的共表达。结果:1.免疫组织化学结果显示:MVH,Notch1,Jagged1和Hes1蛋白在卵巢上皮组织中有表达,其表达水平于3日龄最高,2月龄次之,20月龄表达水平最弱。2.Real-time PCR结果显示:MVH,Oct-4,Notch1,Hes1和Hes5mRNA在卵巢组织中有表达,其表达水平于3日龄最高,2月龄次之,20月龄表达水平最弱甚至几乎没有。3.免疫荧光双标组织化学法显示:小鼠卵巢生殖细胞标志物MVH和Notch信号分子Notch1,Jagged1和Hes1在卵巢上皮有共表达,MVH/Notch1,MVH/Jagged1,MVH/Hes1共表达强度在3日龄卵巢上皮呈强阳性荧光表达,2月龄卵巢上皮呈阳性表达且弱于3日龄,20月龄卵巢上皮几乎没有表达。4.用两步酶消化法分离卵巢组织得到的细胞,经RT-PCR反应检测到生殖细胞标志物MVH,早期生殖细胞标志物Fragilis,多能干细胞标志物Oct-4的阳性表达,而卵母细胞标志物Zp3未见明显表达。推测分离出的细胞为未分化的生殖干细胞。5.免疫荧光细胞双标记法显示:生殖细胞标志物MVH和Notch通路受体Notch1共表达于卵巢生殖干细胞。结论:富集卵巢生殖干细胞的卵巢上皮组织中存在Notch信号通路相关分子Notch1,Jagged1,Hes1,Hes5mRNA和蛋白表达,并且其表达水平均随着小鼠生殖年龄的增加而减弱;卵巢上皮组织中存在MVH/Notch1,MVH/Jagged1,MVH/Hes1的共表达,共表达水平亦随着小鼠生殖年龄的增加而减弱;卵巢生殖干细胞中亦存在MVH/Notch1的共表达。表明,Notch信号通路可能与卵巢生殖干细胞的增殖、分化和衰老有关。