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第一部分人脑胶质瘤中miR-221和p27的表达及临床意义【目的】探讨miR-221在胶质瘤中的表达及其与p27的关系。【方法】收集不同病理级别胶质瘤标本,以荧光定量PCR法和免疫印迹法检测其中miR-221及p27的表达,分析其与胶质瘤病理级别的关系。【结果】 miR-221的表达强度与肿瘤恶性程度呈正相关,与p27的表达呈负相关。【结论】 miR-221的过表达和p27的表达下降或缺失与胶质瘤,尤其是恶性胶质瘤的发生、发展密切相关。第二部分靶向miR-221siRNA慢病毒表达载体的构建和鉴定【目的】构建靶向miR-221的siRNA慢病毒表达载体,为研究RNAi在哺乳动物细胞内抑制靶基因表达奠定基础。【方法】根据siRNA靶点设计的原则运用相关软件设计靶序列并合成其表达框,连接入siRNA表达质粒pGCSIL-GFP,同时构建miR-221表达载体pEGFP-miR-221,共同转染293T细胞,Western blot检测转染后293T细胞中Flag蛋白表达,间接反映各靶序列抑制效率。【结果】重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,并筛选出1号靶序列对miR-221抑制率最高,与对照组相比该组Flag蛋白的表达量最低。【结论】筛选出一个有效的干扰靶点，成功构建了靶向miR-221的siRNA慢病毒载体。第三部分慢病毒介导的RNAi下调miR-221抑制U87胶质瘤细胞生长的研究【目的】通过RNAi下调miR-221，探讨其对U87胶质瘤细胞生长的影响及可能的作用机制。【方法】将构建成功的靶向miR-221的siRNA慢病毒载体，在体外导入U87胶质瘤细胞，应用原位杂交和定量PCR法检测干扰后细胞内miR-221表达变化，Western blot检测p27蛋白表达变化，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell法检测细胞侵袭力改变。【结果】构建的靶向miR-221的siRNA慢病毒表达载体能有效抑制内源性miR-221的表达，上调p27蛋白的表达，同时抑制肿瘤细胞生长，诱导凋亡，降低细胞的侵袭力。【结论】使用靶向miR-221的RNAi慢病毒载体能够有效抑制miR-221的表达，抑制U87胶质瘤细胞的恶性表型，为以miR-221为靶点的胶质瘤基因治疗的后续研究提供思路。