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哺乳动物卵泡在发育过程中绝大多数闭锁退化,只有少数卵泡发育成熟至排卵。卵泡闭锁的本质以及内在的分子事件一直是一个研究的热点。近年来,随着细胞凋亡研究的进展,人们逐渐证实卵泡闭锁的本质是卵泡细胞凋亡的过程,但是有关山羊卵泡发育、闭锁以和卵泡细胞凋亡以及相关的内分泌调节和分子机制有待于进一步的研究。本实验主要以山羊为实验动物进行了一系列的研究,主要包括:山羊卵泡闭锁过程中的卵泡细胞凋亡以及检测手段的研究。发情不同时期卵泡发育、类固醇激素分泌以及颗粒细胞凋亡的变化规律以及相互关系。不同健康程度卵泡中颗粒细胞凋亡比例,类固醇激素和胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ水平的变化。山羊FSH处理前后类固醇激素水平、卵巢卵泡数目、颗粒细胞凋亡以及胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ水平的变化。体外培养完整卵泡过程中,FSH和IGF-Ⅰ在促进类固醇激素生产,抑制颗粒细胞凋亡中的作用。体外培养颗粒细胞过程中,FSH和IGF-Ⅰ在促进类固醇激素生产,抑制颗粒细胞凋亡中的作用。体外培养COCs过程中,FSH和IGF-Ⅰ对体外成熟以及卵丘颗粒细胞凋亡的影响。结果表明: 1、组织学切片和细胞涂片凋亡检测以及DNA梯状电泳分析证明山羊闭锁卵泡中存在颗粒细胞凋亡现象。 2、颗粒细胞凋亡是卵泡中生理现象,随着卵泡闭锁凋亡颗粒细胞的比例增多。健康、轻度闭锁以及闭锁卵泡中颗粒细胞凋亡的比例分别是0.13±0.02,0.32±0.02和0.51±0.02。 3、不同健康程度的卵泡中类固醇水平以及颗粒细胞凋亡比例不同。在健康卵泡中,雌二醇的浓度较高,孕酮的孕酮的浓度较低,雌二醇和孕酮的比值大于1。随着闭锁的进行,雌二醇的浓度下降,孕酮的浓度升高,雌二醇与孕酮的比值小于1。 4、山羊发情的不同时期,颗粒细胞凋亡比例、类固醇激素的水平以及卵泡数目都发生变化。从总体看,大卵泡中颗粒细胞凋亡的比例较低,小卵泡凋亡的比例较高。类固醇激素在大卵泡中的水平都很高,雌二醇与孕酮的比值大于1。而小卵泡中类固醇水平较低,雌二醇和孕酮的比值降低,并且在大多数时候小于1。在整个发情周期中卵泡数目没有明显的变化。小卵泡数目较低,决定了整个卵巢卵泡数目的变化。 5、FSH处理后,山羊中卵泡内颗粒细胞凋亡比例降低,但是大卵泡和小卵泡中颗粒细胞凋亡比例没有明显的影响。大卵泡和中卵泡的数目显著增多,但是小卵泡的数目明显降低。FSH体内能够提高中卵泡中雌二醇的水平,但是对血清以及其它卵泡液中的类固醇水平没有影响。 6、FSH和IGF-Ⅰ都能够促进卵泡中孕酮的分泌但是对雌二醇没有明显的影响。FSH能够促进培养卵泡IGF-Ⅰ的分泌,但是对IGF-Ⅱ的分泌没有明显的影响。 7、体外培养颗粒细胞能够自发的发生凋亡,FSH和IGF-Ⅰ都能够抑制体外培养颗粒细胞凋亡,促进孕酮分泌。FSH能够促进IGF-Ⅰ的分泌,但是FSH的这些作用能够倍H89阻断。 博士学位论文 山羊卵巢卵泡发育、闭锁及其调控机理的研究 东北农业大学8、FSH和IGF能够促进COCS的助+成熟,抑制卵丘颗粒细胞的凋亡。卵丘颗粒细 胞凋亡比例与coes的成熟率呈负相关。