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目的:本课题旨在研究西地那非对新生大鼠高氧致支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia BPD)模型的影响,并探讨西地那非影响BPD发生发展的机制,为西地那非在新生儿支气管肺发育不良的临床应用提供实验依据。
方法:模型制作:八十只足月新生Sprague-Dawley(SD)大鼠出生后12小时内随机分为四组:空气+生理盐水组(A组)、空气+西地那非组(B组)、高氧+生理盐水组(C组)、高氧+西地那非干预组(D组)。其中A、B两组在常压空气中喂养(FiO2=0.21),C、D两组置于玻璃氧箱内持续吸入高浓度氧(FiO2=0.85),B、D两组每天予以西地那非100mg/kg背部皮下注射,A、C两组每天予以等量生理盐水背部皮下注射,持续14天。在实验的第14天处死大鼠,留取肺组织标本。H-E染色观察各组肺组织的病理改变;测定放射状肺泡计数及肺微血管密度;用免疫组织化学方法检测肺组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growm factor VEGF)的蛋白表达水平及肺组织内皮型一氧化氮合酶(endothelium nitricoxidesynthase eNOS)蛋白表达水平;用RT-PCR方法检测肺组织VEGFmRNA表达水平和eNOSmRNA表达水平。
结果:与A组相比较,高氧条件下C组大鼠肺组织肺泡停止生长,肺泡结构缺失、数量减少,肺泡腔增大,并且伴随肺泡微血管密度减少,与人类BPD患儿的肺部病理学形态相似,而西地那非干预组(D组)的肺泡发育较C组有明显改善。C组的放射状肺泡计数及微血管密度较A组明显减少(P<0.001),而D组的放射状肺泡计数和微血管密度较C组明显增加(P<0.001),D组与A组相比较放射状肺泡计数及微血管密度无明显差异(P>0.05)。C组大鼠肺组织中的eNOSmRNA和蛋白表达较正常对照组(A组)有所增加(P<0.001),予以西地那非组eNOSmRNA和蛋白表达较未予以西地那非组均有明显增加(B组比A组、D组比C组)(P<0.001)。C组大鼠肺组织中的VEGFmRNA和蛋白表达较正常对照组(A组)明显降低(P<0.001),予以西地那非组VEGFmRNA和蛋白的表达较未予以西地那非组均有明显增加(P<0.001)(B组比A组、D组比C组)。
结论:本实验利用高氧条件成功复制大鼠BPD模型,西地那非可促进大鼠肺泡生长和肺微血管的生成,对新生大鼠高氧致支气管肺发育不良具有一定的保护作用。西地那非通过促进eNOS的表达,从而降低肺内血管压力,促进肺微血管生成,对高氧所致新生大鼠支气管肺发育不良具有保护作用,可能为其作用机制之一;西地那非促进VEGF的表达,使肺内微血管形成增多,从而促进肺泡形成,可能是其又一作用机制。