【摘 要】
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本文旨在探究手性自组装短肽SciobioⅡ与SciobioⅣ用于韧带成纤维细胞三维培养及对前交叉韧带损伤修复效果,并对其作用的初步机制进行研究。通过紫外光谱仪、红外光谱仪及圆二色谱仪分析其短肽自组装后的二级结构及结构组成成分;苯胺蓝与刚果红染色观察短肽形成水凝胶能力及自组装前后宏观形貌;透射电镜分析短肽自组装后以及加入生长因子后的微观形貌。细胞实验,将自组装短肽SciobioⅡ与SciobioⅣ应
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本文旨在探究手性自组装短肽SciobioⅡ与SciobioⅣ用于韧带成纤维细胞三维培养及对前交叉韧带损伤修复效果,并对其作用的初步机制进行研究。通过紫外光谱仪、红外光谱仪及圆二色谱仪分析其短肽自组装后的二级结构及结构组成成分;苯胺蓝与刚果红染色观察短肽形成水凝胶能力及自组装前后宏观形貌;透射电镜分析短肽自组装后以及加入生长因子后的微观形貌。细胞实验,将自组装短肽SciobioⅡ与SciobioⅣ应用于韧带成纤维细胞培养;利用FITC标记的鬼笔环肽荧光染色法观察三维环境中HLF的细胞骨架;利用CCK-8、双重荧光染色法、流式细胞术检测三维环境中HLF细胞的活性;荧光定量PCR检测二维和三维环境中相关生长因子及蛋白分子的m RNA表达差异。建立兔前交叉韧带损伤模型,通过HE染色、Masson染色、免疫组织化学技术分析韧带愈合过程的病理变化,PCR检测韧带修复过程相关蛋白基因的表达情况。结果显示:自组装短肽都可在盐离子触发下,形成主要含量为β折叠的相对稳定的二级结构,并可进一步自组装形成宏观形貌为网片状薄膜的水凝胶,微观形貌为纳米级的纤维网络支架结构,满足作为细胞三维培养基质的条件;HLF细胞在短肽基质形成的三维空间中,呈圆球形生长且状态良好;q PCR显示短肽促进了血管内皮生长因子VEGFA的表达;调节ERK2的表达。动物实验表明,自组装短肽可一定程度促进兔前交叉韧带损伤修复;HE染色显示短肽可促进纤维细胞的活跃及增生,免疫组化和q PCR结果显示,短肽组较对照组上调了Col1A1、Col3A1的表达,促进了CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达量,并调节MMP-8、MMP-13的表达,综上所述,本文采用的新型自组装短肽可作为韧带成纤维细胞的三维培养基质,可黏附并控释生长因子,能够在伤口处凝胶化,一定程度促进前交叉韧带损伤修复,具有微创应用的潜在性,可以成为ACL损伤患者的一种潜在治疗方式,具有临床应用前景。
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