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研究目的:口腔癌是世界第六位最常见的癌症,它的转移、复发以及化疗耐受是导致肿瘤治疗失败和患者死亡的主要原因。然而针对以上问题仍缺乏有效的治疗手段。上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在肿瘤的转移、复发中起重要作用。而转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是进行EMT相关研究的主要诱导剂。双硫仑(disulfiram,DSF)是一种有效治疗酗酒的药物。近年来,人们发现DSF具有促进肿瘤细胞凋亡、抑制侵袭转移并逆转肿瘤细胞耐药的特征。本实验利用TGF-β诱导口腔癌细胞株KB发生EMT,探究DSF是否能逆转这一过程,进而达到抑制口腔癌侵袭迁移并逆转耐药的效果。研究方法:本实验以口腔癌细胞株(KB)及口腔癌细胞耐药株(KBV)为研究对象。首先,采用不同浓度(1μM、5μM、10μM、20μM和40μM)DSF及10 ng/ml TGF-β对细胞预处理24 h。通过MTT法检测细胞增殖能力;通过细胞克隆形成实验测定细胞克隆形成能力和增殖能力;通过Annexin V/PI双染色法检测细胞的凋亡和坏死;通过transwell实验和细胞划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力;通过实时定量RT-PCR方法检测上皮和间充质标志物(E-钙粘蛋白、波形蛋白)、干细胞标志基因(SOX2及OCT4)的m RNA表达水平。所有实验结果至少重复3次。统计学分析采用SPSS17.0统计软件进行t检验。研究结果:1.TGF-β(10 ng/ml)能有效诱导KB由多角形变为长梭形,并促进其侵袭和迁移。随着DSF浓度的增加,KB细胞的形态逐渐恢复为TGF-β诱导前的形态。DSF浓度≥5μM时,表现出对TGF-β诱导的KB侵袭、迁移的明显抑制(P<0.05),并呈浓度依赖性。2.TGF-β能促进KB细胞间充质标志物(波形蛋白)的表达,降低上皮标志物(E-钙粘蛋白)的表达。这表明TGF-β能诱导KB细胞发生EMT。DSF能显著降低波形蛋白的表达,在高剂量时增加E-钙粘蛋白的表达。这表明DSF能抑制TGF-β诱导的KB细胞EMT。3.当DSF浓度≥5μM时,能显著抑制KB细胞的增殖(P<0.05)。当DSF浓度≥10μM时,能显著抑制KB细胞形成克隆的数量和直径(P<0.05)。当DSF浓度≥20μM时,能明显促进KB细胞的凋亡(P<0.05)。4.KBV细胞对肿瘤化疗药物长春新碱显示出耐受性。当联合5μMDSF时,KBV细胞对长春新碱的耐受性降低。5.DSF能有效降低KB细胞干细胞标志基因SOX2和OCT4的m RNA表达水平(P<0.05)。研究结论:DSF不仅能在体外抑制TGF-β诱导的EMT,抑制口腔癌细胞的侵袭和迁移,还能体外抑制肿瘤细胞的增殖、克隆形成,促进凋亡。此外,DSF能降低口腔癌耐药株的耐药性,并降低口腔癌细胞的干性。