乙醇耐性是酿酒酵母发酵过程中的一个重要性能特征。提高酿酒酵母的乙醇耐性不仅可以提高发酵性能和降低成本,而且还会推动乙醇产业的发展。SPT8是转录复合体SAGA的一个重要亚基。在转录过程中,SAGA复合体通过SPT8与TBP相结合。本文通过对酿酒酵母转录因子SPT8的定向进化来研究其对酿酒酵母乙醇耐性的影响。其主要研究结果如下:1、酿酒酵母穿梭质粒pUG6上分别连入强启动子PGK、终止子CYC1以及目的基因SPT8,构建过表达载体pUPST。转化酿酒酵母菌株Y01,得到含过表达载体的过表达菌株YS1。检测菌株的生长OD600,比较过表达菌株与出发菌株Y01的生长情况,统计分析得出其差异不显著(P>0.05)。2、采用易错PCR的方法构建SPT8突变文库,转化酿酒酵母Y01,经过多次筛选得出乙醇耐性明显提高的两个突变菌株YSEp1和YSEp2。在14%乙醇浓度下,两个突变株的生长速率均快于出发菌株,突变菌株的最大菌体浓度较出发菌株分别提高了 8.94%(P<0.01)和4.67%(P<0.01)。但是,在无乙醇添加下两个突变株的生长速率与出发菌株差异不显著(P>0.05)。在相同的发酵条件下,突变菌株YSEp1的乙醇产量相对于对照菌株提高了 10.8%(P<0.01),而突变菌株YSEp2的乙醇产量相对于出发菌株提高了 4.81%(P<0.01)。3、为了工程菌株的安全,将KanMX筛选标记基因切除,分别命名为YSEp1-K和YSEp2-K。对两个菌株的突变位点进行分析发现,两个突变菌株Asn156His和Gly585Ser两个突变位点是一样的,推测这两个位点均可能影响了 SPT8与TBP等转录因子的结合作用,从而提高酿酒酵母的乙醇耐性。4、采用实时荧光定量PCR的方法得出,过表达菌株YS1、突变菌株YSEp1-K以及突变菌株YSEp2-K的SPT8基因mRNA的表达量分别是是出发菌株Y01的3.405 倍(P<0.01)、5.312 倍(P<0.01)和 4.384 倍(P<0.01)。