目的:通过复方雷公藤外敷对CIA大鼠血清和滑膜组织中白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素1(Ang-1)的表达以及对滑膜组织ERK通路活化的影响,探讨复方雷公藤外敷治疗类风湿关节炎湿热瘀阻证的抗炎、镇痛与减轻血管翳形成的作用机制。为复方雷公藤外敷剂在临床治疗类风湿关节炎提供治疗方向和科学依据。方法:将40只健康雌性SD大鼠逐只称重后按随机序列法分为4组,复方雷公藤外敷(0.50g生药/(kg·d))、扶他林外敷组(0.016ml/(kg·d))、模型组、正常组。采用Ⅱ型胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠模型,使用Ⅱ型胶原乳化剂在大鼠尾根部皮下注射,在第七天后于相同部位注射等量Ⅱ型胶原乳化剂以加强免疫,建立CIA大鼠模型。首次免疫后第14天开始涂抹外敷药物,雷公藤外敷组于大鼠双后肢膝关节以下部位去毛,每次给予外敷制剂0.50g生药/(kg·d),相当于12.5倍人临床用量,涂于膝关节上下0.5cm范围及自踝关节上0.5cm处以下(包括全部足趾),涂抹时间每天上午9:00-10:00,每天1次,连续涂抹28天。扶他林外敷组每次给予扶他林乳胶剂0.016ml/(k·d),相当于12.5倍人临床用量,给药方法、时间同雷公藤外敷组。模型对照组、正常对照组不给予特殊药物处理。在外敷过程中观察记录各组大鼠的活动情况及行为改变、体重变化、关节肿胀度等。外敷结束后,各组大鼠均于腹主动脉取血,将新鲜血液注入离心管,离心后收集血清,留取大鼠膝关节滑膜组织,留取大鼠后肢踝关节及肝、肾、卵巢组织。用ELISA法测定各组大鼠血清及滑膜组织白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素1(Ang-1)的含量水平;Real-time PCR法测定各组大鼠滑膜组织白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素1(Ang-1)的mRNA表达水平;Western Blot法检测滑膜组织中细胞外信号调节激酶(ERK)通路的活化情况;并进行大鼠后肢踝关节关节及肝、肾、卵巢病理检测。结果:1.关节肿胀度变化首次免疫后第10天左右起,各组造模大鼠后足开始肿胀,第21天左右肿胀程度达到高峰,之后关节肿胀程度稍有减轻;模型组大鼠后足关节较正常组明显肿胀(P<0.001),两组外敷组大鼠关节肿胀程度均较模型组减轻。复方雷公藤外敷组大鼠从免疫后2周起后足体积均较模型组同时间降低,差异均有统计学意义(P<0.05 或 P<0.01)2.大鼠关节病理切片正常组大鼠关节面光滑,关节间隙大小正常,关节囊结构完整,关节腔两面滑膜软骨结构光滑完整,层次分明,关节腔无炎症细胞浸润,无滑膜组织增生,关节两端骨组织致密。模型组关节间隙明显增宽,被增生的滑膜组织等完全填充,可见大量炎症细胞浸润,关节软骨及关节面严重破坏,骨实质侵蚀,结构紊乱。扶他林外敷组和雷公藤外敷组关节病理较模型组明显改善,两者中以雷公藤外敷组改善程度更为显著,可见相对清晰的关节面、关节间隙,关节腔有少量滑膜组织和炎症细胞浸润,关节两端骨组织结构尚完整,骨实质疏松,存在少量炎症细胞浸润。3.大鼠肝脏、肾脏、卵巢病理切片雷公藤外敷组大鼠肝脏、肾脏、卵巢病理与正常组大鼠相比未见明显异常。4.血清细胞因子表达水平与正常组相比,CIA模型组血清中IL-1β、TNF-α、Ang-1含量明显升高(P<0.01);与模型组比较,复方雷公藤外敷组大鼠血清中IL-1β、TNF-α、Ang-1含量均降低(P<0.01或P<0.001)。而各组大鼠血清中VEGF含量均测不到,可能与CIA大鼠中VEGF主要在滑膜血管中分泌有关,具体原因有待进一步探究。5.滑膜组织细胞因子表达水平CIA模型组滑膜组织中IL-1β、TNF-α、VEGF和Ang-1含量较正常组明显升高(P<0.001)。与模型组相比,复方雷公藤外敷组各细胞因子水平均显著降低(P<0.01 或 P<0.001)。6.滑膜组织细胞因子mRNA的表达水平滑膜组织细胞因子mRNA的表达水平趋势与滑膜细胞因子含量水平一致,CIA模型组滑膜组织IL-1β、TNF-α、VEGF、Ang-1的mRNA表达均较正常组显著升高,复方雷公藤外敷组各细胞因子mRNA水平均不同程度降低。(P<0.05或P<0.01或 P<0.001)7.Western Blot检测滑膜组织ERK通路蛋白的表达与正常组相比,CIA模型组ERK通路蛋白磷酸化水平明显升高;两组外敷组与CIA模型组相比,ERK通路蛋白磷酸化水平均有不同程度的降低,雷公藤外敷组降低ERK通路蛋白磷酸化水平更为显著。结论:1.复方雷公藤外敷剂可以减轻CIA大鼠关节肿胀度,有良好的抑制滑膜组织增殖、减少炎症细胞的浸润、延缓骨与软骨破坏的效果。2.复方雷公藤外敷剂可以降低CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α、Ang-1的含量,下调滑膜组织中IL-1β、TNF-α、Ang-1、VEGF的含量及mRNA水平的表达。3.复方雷公藤外敷剂通过抑制CIA大鼠滑膜组织ERK通路的活化发挥抑制滑膜组织增殖、减少滑膜中血管新生和血管翳形成的作用。4.复方雷公藤外敷剂外敷治疗无明显肝、肾、生殖毒性。