【摘 要】
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第一部分胶质母细胞瘤术后同步放化疗的生存分析目的:分析胶质母细胞瘤术后放疗患者与生存相关的预后因素,探索在治疗中可以进行干预的临床特征,为进一步的研究提供基础。患者和方法:收集南京医科大学第一附属医院（2016年5月至2019年3月）和东部战区总医院（2012年5月至2018年5月）放疗科治疗的胶质母细胞瘤术后放疗患者共71例。收集整理其相关临床资料。采用IBM SPSS 24统计软件包进行数据分
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第一部分胶质母细胞瘤术后同步放化疗的生存分析目的:分析胶质母细胞瘤术后放疗患者与生存相关的预后因素,探索在治疗中可以进行干预的临床特征,为进一步的研究提供基础。患者和方法:收集南京医科大学第一附属医院（2016年5月至2019年3月）和东部战区总医院（2012年5月至2018年5月）放疗科治疗的胶质母细胞瘤术后放疗患者共71例。收集整理其相关临床资料。采用IBM SPSS 24统计软件包进行数据分析。Kaplan-Meier方法用于计算患者的总生存时间（OS,overall survival）和肿瘤无进展生存时间（PFS,progression free survival）。Logrank方法用于对各项临床参数进行单因素分析和统计检验。Cox回归模型用于对临床参数进行多因素分析。结果:中位随访时间是24.9（95%CI（confidence interval,置信区间）,21.6-28.1）个月。全组患者的中位OS是16.9（95%CI:12.8-21.0）个月。1、2、3年生存率分别为75.3%,32.2%和22.1%。中位PFS是9.8（95%CI:9.2-10.4）个月。1、2、3年肿瘤无进展生存率分别为39.6%,24.2%和19.4%。Logrank单因素分析结果显示放疗前KPS评分（χ~2=8.265,p=0.004）、重要脑部结构是否受侵（χ~2=10.993,p=0.001）及是否有术后残留（χ~2=5.454,p=0.020）和患者的总生存时间明显相关;影响患者PFS的因素包括放疗前KPS评分（χ~2=8.444,p=0.004）和重要脑部结构是否受侵（χ~2=11.370,p=0.001）。Cox回归模型对患者OS的分析显示:重要脑部结构受侵（HR=2.997,95%CI,1.449-6.199,p=0.003）和KPS评分（HR=0.412,95%CI,0.218-0.778,p=0.006）是独立预后因素。PFS分析显示:脑部结构受侵（HR=3.572,95%CI,1.786-7.143,p=0.000）和KPS评分（HR=0.390,95%CI,0.217-0.700,p=0.002）这两者也是影响患者PFS的独立预后因素。大于60Gy的放疗剂量对于患者的OS（χ~2=0.980,p=0.341）和PFS（χ~2=0.200,p=0.655）并无明显改善。治疗过程中观察到1例血液系统3级毒性。患者的死亡原因除外1例自述为心肌梗塞和1例脑梗外其他均为颅内肿瘤相关的因素。结论:本研究发现术前患者肿瘤有无侵及颅内重要结构和放疗前KPS评分是与患者生存和无进展生存高度相关的独立预后因素。小幅度的提高放疗的剂量并不能改善患者预后。第二部分替莫唑胺联合放疗通过促进胶质瘤细胞发生过量氧化应激产生凋亡目的:从氧化应激的角度探索联合替莫唑胺（TMZ,Temozolomide）同步放化疗显著改善术后胶质瘤患者预后的可能机制。方法:我们利用胶质瘤细胞系GL261和C6,在体外经TMZ处理后,检测GL261和C6细胞干性标记物CD144、Sox2、ZEB-1、survivin表达水平的变化,同时利用ROS探针检测细胞活性氧的变化,并检测氧化应激通路中Nrf-2和Keap-1的表达水平变化。接着我们联合放疗,观察联合处理对肿瘤细胞的凋亡水平、干性指标、克隆形成率和氧化应激水平的影响。最后在动物水平使用裸鼠移植瘤的方法来观察经TMZ联合放疗后的肿瘤细胞在体内生长的大小情况和肿瘤组织细胞的活性氧变化情况。实验数据采用Graph Pad Prism 5软件进行处理,多组组间的显著性差异采用One-way ANOVO,并以Tukey法进行组间两两比较,均数之间比较采用t检验。结果:GL261和C6经TMZ（100μM）处理24h后,干性指标CD144、Sox2、ZEB-1、survivin表达水平增加,同时氧化应激通路被激活,活性氧水平增加,Nrf-2表达上升,Keap-1表达下降。联合放疗后,氧化应激被过度激活,Nrf-2表达明显上升,Keap-1表达明显下降;GL261肿瘤细胞的凋亡率达40%显著高于对照组的5%。同时ZEB-1,Sox2和CD144等干性指标降低。在克隆形成实验中TMZ联合放疗组的克隆形成率为1.14%,显著低于TMZ组（4.67%）和放疗组（3.64%）。在裸鼠成瘤实验中,联合处理组的肿瘤体积均值为2.34 mm3,明显小于TMZ组（59.38 mm3）和对照组（31 mm3）。在裸鼠肿瘤组织中亦观察到了过量的氧化应激反应。结论:本研究发现,低浓度的TMZ可以诱导GL261细胞和C6细胞产生低水平氧化应激,并诱导其干性增加,增加对药物的耐受性。而放疗联合TMZ处理胶质瘤细胞,可以诱导其发生过量的氧化应激,进而导致干性下降,促进胶质瘤细胞的凋亡。
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