特异性抗原致敏的DC细胞诱导CIK及CTL细胞对肿瘤细胞抑瘤及凋亡作用的研究

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目的:比较探讨特异性抗原致敏的树突状细胞(dentritic cells DC)诱导的CIK(cytokine induced killer)细胞和(cytotoxic lymphocytes,CTL)对B16黑色素瘤的杀伤作用以及对肿瘤细胞凋亡作用的影响。树突状细胞(DC)是到目前为止发现的功能最为强大的抗原递呈细胞,具有摄取、加工、递呈肿瘤相关抗原,并激活初始免疫功能的独特功能。细胞因子诱导的杀伤细胞CIK和细胞毒性T淋巴细胞CTL作为新型高效的免疫活性细胞,在肿瘤过继性细胞免疫治疗中得到了广泛的应用。本研究利用DC细胞与CIK细胞和CTL细胞共同培养,并且负载特异性抗原。期望可以获得数量更多、抗肿瘤活性更强、特异性更好的过继性免疫治疗效应细胞。  方法:采用特异性肿瘤抗原致敏的DC与CIK和CTL细胞共同培养,分析其免疫表型,建立黑色素瘤动物模型,将其分为三组。第一组:DC-CIK效应细胞组;第二组:DC-CTL效应细胞组;第三组:对照组。分别测量各组肿瘤的体积和重量。流式细胞(FCM)检测各组癌细胞增殖周期中。G0/G1期、S期、G2/M期各期细胞的比率和细胞凋亡指数(apoptosis IndexAI)、细胞增殖指数(proliferation Index PI)的变化;透射电镜观察细胞凋亡超微结构的形态学变化;并用MTT法检测各组抗肿瘤免疫效应细胞对B16黑色素瘤肿瘤细胞的杀伤力。  结果:DC-CIK和DC-CTL均可以影响到黑色素瘤肿瘤细胞周期,并且具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,但DC-CIK与DC-CTL之间未发现显著性差异,通过透射电镜观察可以发现两实验组都能促进肿瘤细胞超微结构的凋亡改变,在应用流式细胞(FCM)检测技术对肿瘤细胞增殖周期中的变化进行检测中可以发现;实验组两组与对照组比较G0/G1期细胞比率、AI显著升高,S期未发现明显变化,G2/M期细胞比率以及PI显著下降。DC-CTL细胞组杀伤活性较DC-CIK明显升高。且不同效靶比之间比较,随着效靶比的增高对肿瘤细胞的杀伤作用也越强。  结论:特异性抗原负载的DC-CIK细胞与DC-CTL细胞对B16黑色素瘤均有较强的杀伤作用。并且DC-CIK细胞和DC-CTL细胞都可以通过影响黑色素瘤细胞的细胞周期,诱导肿瘤细胞的凋亡。
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