人肿瘤坏死因子(Tumour necrosis factor alpha,TNFα)是一种多功能性的细胞因子,既参与造血、免疫监视和避免细菌感染等正常的生理过程,又在类风湿性关节炎、移植排异和肿瘤发生等病理过程中扮演着重要的角色。因此,目前靶向于TNFα的抗体及其他拮抗剂已成为全球最炙手可热的生物药物。然而,目前我国在抗TNF α抗体的产业化方面还完全处于空白。鉴于此,本课题围绕抗TNFα人鼠嵌合型抗体(英夫利昔单抗)和抗TNFα纳米抗体(TNF60)展开了以下研究:一方面,本课题通过酶联免疫检测方法对前期转染英夫利昔单抗真核表达质粒后得到的一系列中华仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO)单克隆进行了筛选与鉴定,然后通过亲和纯化方法对所选单克隆细胞株培养上清中的目的抗体进行纯化,并进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。最终,本课题筛选得到了4株高表达英夫利息单抗的CHO细胞克隆,制备了以非聚集体形式存在于溶液中的英夫利息单抗,纯度为87%,浓度为6 mg/mL。另一方面,本课题将TNF60的编码基因连接到pET-22b和pET-28a质粒中,构建获得了 TNF60的原核表达质粒,转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)Rosetta(DE3)中,筛选得到了 TNF60的两种基因工程表达菌,通过响应面法优化确定TNF60的最佳培养条件为:SB培养基,0.1mMIPTG,培养温度为22℃,诱导后培养时间为14 h。经过固相Co2+亲和纯化之后得到纯度为95%的TNF60重组蛋白,经质谱分析显示目的蛋白序列正确、免疫印迹(Western blot)证实重组蛋白具有良好的抗原结合活性,能够有效的作用于TNF α。最后,我们用卡拉胶致小鼠足肿胀炎症模型对TNF60的体内抗炎活性进行了分析。结果显示,重组TNF60能够有效抑制小鼠炎症,给药2 h后,其在66 mg/Kg的剂量下的抑制效果与200mg/Kg剂量下的阳性对照药物阿司匹林相当。