猕猴桃酒生香嗜杀酵母的选育

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近十来年,我国猕猴桃酒生产得到了长足发展。但由于缺乏适宜的猕猴桃酒专用菌种,猕猴桃酒的果香不突出,典型性欠佳;此外,发酵初期的杂菌污染也是导致猕猴桃酒品质不高的重要原因。鉴于此,本研究的目的是选育出既具有优良生香性能、又具有较强嗜杀活性的猕猴桃酒酵母,使其在发酵过程中既能产生更多的香气物质,又能杀灭野生杂菌,保证纯种发酵的顺利进行,生产出高品质的猕猴桃酒。试验采用原生质体电融合方法,对野生优良酵母的分离、生香酵母的筛选、亲本原生质体制备、电融合条件、融合子的筛选与鉴定等内容进行了研究,试验取得以下主要结果。(1)猕猴桃果实上有野生酵母存在。经过分离、培养和小型酿酒试验,从7个不同品种猕猴桃上筛选出1株发酵性能优良的猕猴桃酒用天然野生酵母。(2)将筛选的野生酵母和12株酿酒酵母进行猕猴桃酒酿造试验,通过对各菌株发酵速度测定、酒样理化指标分析和感官评价比较,表明酵母KD起酵时间短,发酵速度快而平稳,酒精产率高,挥发酸含量低,Vc含量高;酵母KD发酵的猕猴桃酒色泽浅黄,滋味醇厚爽口,果香突出,酒香纯正,典型性强。(3)通过GC-MS分析比较,与其他6株酵母相比,酵母KD酿造的猕猴桃酒中,香气物质种类多且含量高,共检出48种香气成分,相对含量97.33%。其中酯类物质19种,相对含量达到34.65%;高级醇7种,相对含量15.85%;有机酸6种,相对含量13.3%。KD菌株产香能力强,酒中酯类物质丰富且含量高,具有浓郁的果香和酒香,是优良的猕猴桃酒生香酵母。(4)生香酵母KD为非营养缺陷型,不具有嗜杀活性。嗜杀酵母5045为组氨酸缺陷和核融合缺陷。以KD和5045为亲本,通过原生质体电融合将5045的嗜杀质粒导入KD中,选育出猕猴桃酒生香嗜杀酵母。(5)研究了影响原生质体形成和再生的影响因素,如预处理液和稳渗液的选择、酶解条件和再生方法等。确定制备5045原生质体的适宜条件为:培养至4h的酵母细胞先用0.8mol/L甘露醇稳渗液洗涤,再用1:1的0.1%EDTA-Na2+0.1%巯基乙醇复合液对酵母细胞进行预处理,并用0.8mol/L甘露醇稳渗液洗净预处理液,然后加入2.5%的蜗牛酶液,在35℃水浴酶解处理60min。在此条件下,原生质体形成率为80.97%,再生率为26.47%,形成率再生率为21.43%,原生质体制备效果最好。(6)制备酵母KD原生质体的适宜条件为:将培养至3h的酵母细胞先用0.8mol/L甘露醇稳渗液洗涤,再用0.1%EDTA-Na2+0.1%巯基乙醇复合液对酵母细胞进行预处理,然后加入2.5%的蜗牛酶液,在35℃酶解30min。在此条件下,原生质体形成率为81.15%,再生率为10.4%,形成率×再生率为8.44%,原生质体制备效果最好,(7)酵母KD和5045原生质体按11比例混合进行电融合,在2KV/cm脉冲场强下,脉冲时间为40μs,脉冲间隔为600ms,脉冲3次,原生质体融合率为6.93×10-5。经过初筛、复筛及酿造试验,筛选出1株性能优良的融合子F16。(8)经对融合子F16进行细胞形态及大小测定、营养缺陷型鉴定、嗜杀活性鉴定、酿造过程中对野生酵母的抑制作用及发酵酒的感官评定和香气分析,确认F16为具有良好嗜杀活性和优良生香性能的猕猴桃酒酵母,遗传了KD酵母的发酵特性和5045的嗜杀性能,是1株应用前景广阔的猕猴桃酒酵母。
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