牛源金黄色葡萄球菌药物敏感性试验和分型研究

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奶牛乳房炎是影响世界奶牛养殖业经济效益的主要疾病之一,而金黄色葡萄球菌是奶牛乳房炎的主要病原菌。因此,本研究对中国动物卫生与流行病学中心2009年~2011年分离自生牛奶的102株金黄色葡萄球菌进行了13种抗菌药物的耐药性的检测,并进行了分子流行病学调查和肠毒素检测。旨在探讨其对抗菌药物的耐药性及致病基因类型,为生产上有效防治奶牛乳房炎提供理论依据。   本研究采用肉汤微量稀释法,对102株牛源金黄色葡萄球菌进行了7类13种抗菌药物的药敏试验。结果显示:102株牛源金黄色葡萄球菌对青霉素、磺胺异恶唑、氨苄西林和红霉素的耐药最为严重,耐药率分别为97.06%、96.08%、82.35%和80.39%,对其他抗菌药的耐药率相对较低,对万古霉素无耐药性;其中仅1株菌株只耐1种药物,其它菌株均具有多重耐药性,多数耐受4~6种药物。可见,牛源金黄色葡萄球菌的耐药性已非常严重,且以多重耐药为主。对不同时间分离菌株的耐药性状况进行比较表明,耐药性有逐年加重的趋势。复方新诺明、头孢噻呋和头孢西丁均为比较敏感的药物,可优先用于奶牛乳房炎的临床治疗。   本研究用SPA基因多态性分型方法对102株金黄色葡萄球菌进行分子流行病学调查。结果显示102株牛源金黄色葡萄球菌全部通过SPA分型,分型率为100%,共分为26个型,t518型最多有21株;t521型有14株;t114型有12株;新型2型有9株;t091型和t519型各有8株;t002型有6株;t2756型和t1751型各有3株;新型1型有2株;t011型、t2467型、t127型、t189型、t954型、t437型、t034型、t796型、t9873型、t7295型、t9010型、t1376型、t078型、t3104型、t267型和新型3型各有1株,其中新型1型、新型2型和新型3型为新发现的基因型,已经提交数据库进行审核。从分型结果来看,这26个型当中以产物大小约300bp左右的t518型最多且分布最广泛,可能为主要的流行株。   用PCR方法对肠毒素基因SEA、SEB、SEC、SED、SEE、SEG、SHH、SEI和SEJ进行分型,结果显示102株金黄色葡萄球菌中,检测到肠毒素基因的有91株,占89.22%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株有50株,占49.02%,带有SEI肠毒素基因的菌株最多,77株,占75.49%。携带传统肠毒素基因SEA、SEB、SEC、SED和SEE的菌株总共有30株,占29.41%。携带新型肠毒素SEG-SEJ的菌株较多共有86株,占84.31%。表明SEI型肠毒素可能与金黄色葡萄球在奶牛乳房炎中的致病性密切相关。
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