肺腺癌细胞miR-185水平与HMGA2、CCNE1表达及对肿瘤细胞迁徙和增殖能力的相关性研究

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目的:通过检测miR-185和其预测靶基因HMGA2、CCNE1在人支气管上皮细胞及肺腺癌细胞中表达情况分析二者之间相关性。MTT法和Transwell小室测定人支气管上皮细胞及肺癌细胞的增殖活性和迁徙能力,研究miR-185对于肺癌细胞迁徙、增殖能力的影响。方法:培养人支气管上皮细胞16HBE及肺腺癌细胞A549、LTEP-a-2、NCI-H1975、NCI-H1650,应用实时荧光定量PCR检测人支气管上皮细胞及4种肺腺癌细胞的miR-185的表达情况以及miR-185的预测靶基因HMGA2、CCNE1mRNA在细胞中的表达水平,分析miR-185和HMGA2、CCNE1mRNA相关性。采用western blot检测人支气管上皮细胞及4种肺腺癌细胞中的HMGA2蛋白、CCNE1蛋白的表达。分析miR-185和HMGA2、CCNE1基因表达相关性。MTT法和Transwell小室比较人支气管上皮细胞及肺癌细胞的增殖迁徙能力差异,分析miR-185对于肺癌细胞迁徙、增殖能力的影响。结果:MiR-185在4株肺腺癌细胞系A549、LTEP-a-2、NCI-H1975、NCI-H1650的相对表达均低于人支气管上皮细胞16HBE,差异有显著性(F=286.476,P<0.05)。HMGA2mRNA在4株肺腺癌细胞系中表达水平明显高于16HBE,差异有显著性(F=184.238,P<0.05)。HMGA2mRNA在16HBE、LTEP-a-2、NCI-H1650、NCI-H1975、A549中的表达水平是逐渐升高的。Pearson相关性分析发现人支气管上皮细胞和肺腺癌细胞miR-185的表达水平与HMGA2mRNA表达水平之间呈负相关(r=-0.976,P <0.01)。CCNE1mRNA在4株肺腺癌细胞中表达水平明显高于16HBE,差异有显著性(F=1959.754,P<0.05)。CCNE1mRNA在16HBE、LTEP-a-2、NCI-H1650、NCI-H1975、A549中的表达是逐渐升高的。Pearson相关性分析发现人支气管上皮细胞及肺腺癌细胞中miR-185的表达水平与CCNE1mRNA的含量之间存在负相关(r=-0.945,P<0.05)。Western blot结果显示HMGA2蛋白在人支气管上皮细胞中是不表达的,但是在4株肺腺癌细胞中均表达,差异有显著性(F=46.135,P<0.05)。CCNE1蛋白在肺腺癌细胞中的表达均高于人支气管上皮细胞,差异有显著性(F=253.631,P<0.05)。MTT实验显示人支气管上皮细胞及肺腺癌细胞的增殖能力有差异,差异具有显著性。Transwell小室结果显示人支气管上皮细胞及肺腺癌细胞的迁徙能力是有差别的,差异具有显著性。在肺腺癌细胞株miR-185的表达下降,其增殖和迁徙能力呈增强趋势,二者具有相关性。结论:在肺腺癌中存在miRNA-185表达水平降低和HMGA2和CCNE1表达增高,二者之间有负相关性。肺腺癌细胞株,其增殖和迁徙能力增强,miR-185的表达下降,二者具有负相关性。MiR-185可能通过靶向作用于HMGA2和CCNE1,在转录后水平调节了HMGA2和CCNE1的mRNA和蛋白质表达水平,进而抑制肺癌细胞的增殖和迁徙,发挥其调节细胞生物学行为的作用。
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