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目的:探讨经方大黄(庶虫)虫丸对Lewis肺癌荷瘤小鼠被动吸烟条件下免疫状态(CD4+CD25+Foxp3+水平和Foxp3基因表达情况)的干预作用,为提高和预防肺癌患者生存质量提供理论和实验依据。 方法: 1.制备 Lewis肺癌荷瘤小鼠:选取清洁级昆明小鼠,将培养好的小鼠Lewis肺癌细胞(LLC),用生理盐水稀释,调整细胞浓度为1×107/ml,于小鼠右腋部皮下注射0.2ml/只进行造模。10天后,将腋下成瘤0.5cm×0.6cm以上的小鼠64只,随机分成模型对照组(模型组)、被动吸烟组(烟熏组)、大黄(庶虫)虫丸组(中药组)、顺铂组(西药组),未造模的小鼠为空白对照组(空白组),每组16只,共5组。 2.给药:被动吸烟组、大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组小鼠均给予被动吸烟,即在动式染毒柜中,采取动式吸入香烟烟雾,主流烟雾和侧流烟雾分别控制在11%和89%。每天染毒6h。同时,大黄(庶虫)虫丸组给予大黄(庶虫)虫丸按1.37g/kg/d给药,灌胃量0.4ml,每天l次,连续28d。顺铂组给予顺铂按lmg/kg腹腔注射(iP),第4、11、18、25天各1次;空白组、模型组灌胃按等容积给蒸馏水,灌胃量0.4ml,每天l次,连续28d。 3.检测指标:分别于7、14、21、28天,观察小鼠的精神、活动、毛色、饮食情况;分别于14、28天,测各组小鼠体重、脾指数、胸腺指数;检测血清IL-2含量、脾组织CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例及转录因子 Foxp3基因表达情况;各组小鼠肺组织、腋部皮下瘤块石蜡包埋切片,HE染色,光镜下观察组织的病理形态学改变。 结果: 1.一般情况:与空白组比较,造模后小鼠的精神、活动、毛色、进食量和饮水量、体重增长均受到影响,其中被动吸烟组影响最明显,体重增长减慢较显;与被动吸烟组比较,大黄(庶虫)虫丸组精神有所改善,活动和饮食量有所增加,体重增长较明显,顺铂组精神、活动无明显变化,体重降低显著;与顺铂组比较,大黄(庶虫)虫丸组小鼠精神状态有所改善,活动和饮食量有所增加,体重增长明显。 2.脏器指数:与空白组比较,造模后小鼠的脏器指数均有所降低,顺铂组降低最明显,2周时脾指数有显著性差异,4周时胸腺指数与脾指数降低均有非常显著性差异;与被动吸烟组比较,大黄(庶虫)虫丸脏器指数有所提高,2周时无显著性差异,4周时出现显著性差异;与顺铂组比较,大黄(庶虫)虫丸组小鼠脾指数提高,并有显著性差异。 3.形态学改变:与空白组比较,造模后小鼠肺组织可见异型性细胞,细胞核大、深染,可见异常核分裂象;被动吸烟可使小鼠肺组织异型性细胞明显增多,可见异型性细胞成半环状及环状排列,病灶周围伴有肺气肿形成、出血及炎细胞浸润;大黄(庶虫)虫丸可使被动吸烟的模型小鼠肺组织异型性细胞减少,病变减轻;顺铂可使小鼠肺组织异型性细胞明显减少,病变减轻,可见个别异型性细胞,偶见细胞核分裂。4周后造模小鼠异型性细胞较2周多,可见明显异型性细胞成半环状及环状排列,有肺泡间隔增厚和炎细胞浸润现象。 4.免疫指标IL-2:与空白组比较,造模后小鼠血清中细胞因子IL-2含量均减少,模型组小鼠有显著性差异,其中被动吸烟组减少最显著,有非常显著性差异;与被动吸烟组比较,大黄(庶虫)虫丸组、顺铂组小鼠血清中细胞因子IL-2含量均增多,均有显著性差异;大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组比较,大黄(庶虫)虫丸提高较明显,但无显著性差异。4周结果与2周相同。 5.免疫指标CD4+CD25+Foxp3+:2周后,与空白组比较,造模小鼠脾组织CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例均提高,其中被动吸烟组提高最显著,并有非常显著性差异;与被动吸烟组比较,大黄(庶虫)虫丸组、顺铂组小鼠脾组织CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例有所下调,顺铂组下调较明显,但均无显著性差异;与顺铂组比较,大黄(庶虫)虫丸组有所上调,但无显著性差异。 4周后,与空白组比较,造模小鼠脾组织CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例均提高,均有显著性差异;与模型组比较,被动吸烟组、大黄(庶虫)虫丸组、顺铂组小鼠脾组织 CD4+CD25+Foxp3+Treg占 CD4+T细胞的比例均下调,均无显著性差异;与被动吸烟组比较,大黄(庶虫)虫丸组、顺铂组均有下调,顺铂组下调较明显,但均无显著性差异。 6.Foxp3基因表达:2周后,与空白组比较,造模小鼠的脾组织Foxp3基因表达均增强,被动吸烟组最明显,有非常显著性差异;与被动吸烟组比较,大黄(庶虫)虫丸组、顺铂组脾组织Foxp3基因表达均下降,并均有非常显著性差异;大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组相比,顺铂组脾组织Foxp3基因表达下降,有显著性差异。 4周后,与空白组比较,模型组、大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组小鼠Foxp3基因表达水平均增强,模型组有非常显著性差异,被动吸烟组小鼠Foxp3基因表达水平下降,有显著性差异;与模型组比较,被动吸烟组、大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组均下降,被动吸烟组、顺铂组均有非常显著性差异,大黄(庶虫)虫丸组无差异;与被动吸烟组比较,大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组小鼠均增强,均有显著性差异;大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组小鼠Foxp3基因表达水平无显著性差异。 结论 1.Lewis肺癌细胞可引起昆明种小鼠腋下瘤块形成; 2.被动吸烟对Lewis肺癌荷瘤小鼠一般情况、体重、脏器指数、形态学改变及免疫指标均有明显影响(P<0.05或P<0.01); 3.大黄(庶虫)虫丸对Lewis肺癌荷瘤小鼠被动吸烟条件下的一般情况、体重、脏器指数、形态学改变及免疫指标均有明显改善及免疫调节作用(P<0.05或P<0.01),与顺铂组比较,无明显差异。其中一般情况、体重、脏器指数变化优于顺铂组(P<0.05)。 4.大黄(庶虫)虫丸对Lewis肺癌荷瘤小鼠一般情况、体重、脏器指数变化优于顺铂组,可能是通过提高小鼠血清中细胞因子IL-2含量,降低小鼠脾组织 CD4+CD25+Foxp3+Treg占 CD4+T细胞的比例及Foxp3基因表达而达到的。