蛹虫草(Cordyceps militaris),是一种具有滋补作用的药、食两用真菌。其药用主要成分有虫草素、虫草酸、虫草多糖、SOD等,具有抗疲劳、提高免疫力、抗菌消炎、抗癌等功效。本文系统研究了蛹虫草的营养生理特性,对其菌丝体原生质体制备、再生及诱变条件进行了探讨,并对虫草素、虫草多糖的提取工艺进行了优化研究。研究结果如下:1.采用在培养基中添加不同碳源、氮源、维生素、无机盐及植物生长调节剂的方法对蛹虫草菌丝生长量进行研究。结果表明:蛹虫草能以多种单糖、双糖、多糖及糖醇作为碳源,其中以蔗糖为最佳碳源,葡萄糖其次,二者之间差异不显著;菌丝体对供试氮源(无机氮源、氨基酸、复合氮源)的利用情况各不相同,其中以复合氮源利用情况最好,其次是氨基酸类,无机氮源最差。其中,蚕蛹粉为氮源的培养基中蛹虫草菌丝体生长情况最好,其次为牛肉蛋白胨和麦芽浸粉;矿物元素钙、钾、铁及维生素B3对蛹虫草菌丝体有显著的促进作用;赤霉素、2,4-D对菌丝体生长有较明显的促进作用,萘乙酸对其菌丝体生长有抑制作用。2.研究了酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂、pH及菌龄对蛹虫草原生质体制备以及再生的影响规律。通过单因素试验确定了各因素的范围,并对以上因子进行正交试验优化。结果表明,以培养6 d (菌龄)的蛹虫草菌丝体,以0.6 mol/L的KCl为渗透压稳定剂、24℃酶解1 h,原生质体得率最高;以培养6 d (菌龄)的蛹虫草菌丝体,0.6 mol/L的KCl为渗透压稳定剂,24℃酶解3 h,原生质体的再生率最高。3.对蛹虫草原生质体诱变进行了初探,确定了紫外线诱变的最佳剂量为20.63 s~27.61 s,亚硝酸诱变最佳剂量为14.84 min~19.89 min。4.采用均匀试验设计对蛹虫草子座及子座培养剩余培养基中虫草素和虫草多糖提取条件进行了优化。结果表明,蛹虫草子座及子座培养剩余培养基中虫草素最佳提取工艺条件分别为:提取温度100℃,液料比25:1,提取时间330 min;提取温度40℃,液料比25:1,提取时间330 min。采用此工艺参数,虫草素的得率分别达到0.27 %、0.23 %。验证试验得出蛹虫草子座及子座培养剩余培养基中虫草素得率分别为0.25 %、0.29 %,与回归方程的预测值接近。5.蛹虫草子座及子座培养剩余培养基中虫草多糖最佳提取条件分别为:提取温度100℃,液料比25:1,提取时间329.99 min;提取温度69.98℃,液料比17:1,提取时间112.18 min。预期最大得率分别为4.13 %,3.71 %。按得出的最佳提取条件进行虫草素提取验证试验,得到该条件下蛹虫草子座及子座培养剩余培养基中虫草多糖平均得率为4.26 %、3.55 %,与回归方程的预测值接近。