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电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)是线粒体外膜上最丰富的蛋白,同时还存在于其他细胞结构中,是许多化合物,如阴离子和大分子化合物 DNA、tRNA的主要运输通道。VDAC还参与由生物和非生物胁迫所导致细胞程序性死亡。 本实验室本实验室前期已经鉴定出水稻基因组8个完整的vdac基因,克隆获得了vdac3、vdac4、vdac5三个基因的ORFs,本文对这三个水稻vdac基因进行了进一步研究,实验进展如下: 1、以YTB的cDNA为模板,通过特异性引物PCR扩增出osvdac3、osvdac5的全长片段以及其 C端和N端片段,将目的基因片段导入到含有 GST标签的pGEX-4T-1原核表达载体中,并转化入大肠杆菌BL21感受态细胞,可溶性重组蛋白的诱导表达最佳条件为:15℃,0.7 mmol/L IPTG诱导6 h。 2、纯化出含有GST标签的OsVDAC3作为诱饵,用GST pull down捕获在YTB叶片中与 OsVDAC3相互作用的蛋白,捕获的蛋白具有差异性条带,取差异性条带经行质谱鉴定,但没有明确的蛋白。 3、采用OsVDAC3、OsVDAC4、OsVDAC5的多克隆抗体对水稻YTA、YTB的根、茎、叶及五个发育时期的穗子蛋白进行Western Blot检测,实验结果表明,OsVDAC3、OsVDAC4、OsVDAC5在不同组织和不同发育时期中蛋白的表达量存在差异,OsVDAC3在这些组织中表达量较少,OsVDAC4在这些组织中的表达量相对较高,OsVDAC5在YTA的Ⅲ期、Ⅳ期中的表达量相对较高,暗示着不同的VDAC蛋白可能在不同的组织中与不同的发育时期中行使这不同的功能。