【摘 要】
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背景与研究目的 高危型HPV感染在宫颈癌的发生发展中起着至关重要的作用,特别是E6/E7癌基因,已被证实有恶性转化能力,因此它们已成为宫颈癌基因治疗的理想靶点。RNA干扰(RNA
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背景与研究目的 高危型HPV感染在宫颈癌的发生发展中起着至关重要的作用,特别是E6/E7癌基因,已被证实有恶性转化能力,因此它们已成为宫颈癌基因治疗的理想靶点。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是新近发展起来的一种封闭基因表达的有效方法,它比反义寡核苷酸和核酶技术能更高效的抑制目的基因的表达。已有研究证实化学合成的siRNA(small interfering RNA)能高效地介导RNAi作用,但作用持续时间短,而采用siRNA表达载体(small interfering RNA expression vector)的方法可能延长作用时间。因此本研究旨在探讨HPV16E7特异性siRNA表达载体对宫颈癌Caski和SiHa细胞E7基因的沉默作用及作用持续时间,以及体内外对肿瘤细胞生长的影响,探索siRNA表达载体作为宫颈癌基因治疗新策略的可行性。 方法 1.利用计算机辅助设计软件,设计合成了含不同HPV16E7特异性序列的56nt寡核苷酸片段,并将其定向克隆入真核表达载体psiRNA,得到重组质粒P1、P2、P3;2.利用脂质体将重组质粒转染CaSki和SiHa细胞,以荧光定量RT-PCR检测不同时间点转染前后E7 mRNA的变化,以免疫荧光标记法、western blot检测转染前后E7蛋
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