光甘草定与甘草酸的联合提取、分离纯化研究

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国内外对光果甘草中有效成分的开发、生产主要是光甘草定,而把含量较高的甘草酸遗弃在废渣中,造成资源的极大浪费。提高甘草的有效利用率,实现甘草资源的综合利用具有重要意义。本实验建立了一种高效液相色谱法同时测定光甘草定与甘草酸含量的方法。采用梯度洗脱的方法缩短了分析时间并且可以将光甘草定和甘草酸与杂质化合物有效的分离。确定了联合提取光甘草定和甘草酸的最佳工艺条件,溶剂为60%乙醇,提取时间为25 min,液固比为30:1,提取次数为3次。光甘草定提取率为0.33%,甘草酸提取率为6.42%。实验采用二氯甲烷和10%乙醇液液萃取法萃取甘草粗提物样品中的光甘草定与甘草酸,光甘草定的纯度为12.90%,甘草酸的纯度为17.85%。优化了大孔吸附树脂分离纯化光甘草定的工艺路线。选用HPD100大孔吸附树脂;30%乙醇溶液作为光甘草定的上样溶液;上样液浓度为0.5-0.6 mg/mL;上样流速为3 BV/h;洗脱流速为7 BV/h;洗脱液体积为8 BV;采用梯度洗脱法,用40%乙醇除杂后,收集70%乙醇洗脱液作为产品,光甘草定的纯度为23.90%;采用树脂纯化两次的方法提高其纯度,第二次使用AB-8大孔吸附树脂,光甘草定纯度由23.90%提高到35.10%。建立了大孔吸附树脂分离纯化甘草酸的工艺路线。工艺参数为:选用AB-8大孔吸附树脂;上样液浓度为1.7 mg/mL;上样液流速为2BV/h;洗脱流速为7 BV/h:洗脱液体积为8 BV;采用梯度洗脱法,用20%乙醇除杂后,收集50%乙醇洗脱液作为产品,甘草酸的纯度为61.94%。研究了逆流色谱分离纯化光甘草定。选用正己烷-乙酸乙酯-乙腈-甲醇-水(5:6:1:2:2)体系,固定相保留率为为43%,得到的光甘草定产品纯度最高为95%。研究了制备色谱分离纯化光甘草定。流动相:甲醇:水(70:30v/v);流速:10 mL/min;上样量:10mg;柱温30℃;检测波长:283nm。得到光甘草定产品最高纯度可达97%,回收率为52%。研究了光甘草定与甘草酸对酪氨酸酶抑制性的影响。发现光甘草定确实有很强的酪氨酸酶抑制性,且纯度越高对酪氨酸酶抑制率越高。但对于甘草酸来说,酪氨酸酶抑制性不是很明显。
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