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目的:1.用不同的Her-2/neu癌基因蛋白分别诱导得到三种不同的DCs肿瘤疫苗,并和自体T淋巴细胞混合培养,检测各组DCs肿瘤疫苗的表型及其对自体CTL细胞分泌IFN-γ的刺激作用；2.诱导CD8+NKT细胞,检测其增值率及表型变化；3.为Her-2/neu高表达乳腺癌患者的个体化免疫治疗提供更有效的方法。
方法:抽取健康人外周血,采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),经不同的细胞因子刺激后培养DCs和CD8+NKT细胞,并用三种不同的Her-2/neu癌基因蛋白负载DCs,制备DCs肿瘤疫苗,检测DCs肿瘤疫苗和CD8+NKT细胞的增值率及其表型变化。诱导7天时,用各组DCs瘤苗与自体T淋巴细胞以1:10混合培养3天,检测各组CTL细胞IFN-γ分泌量。
结果:流式结果显示,经Her-2/neu癌基因蛋白复合物冲击后,CD80、CD86和HLA-DR的表达显著增高(P<0.01),其中尤以Her-2/neu高表达乳腺癌细胞株制备的Hsp70-Her2/neu癌基因蛋白复合物组为最高(P<0.01)。负载癌基因蛋白复合物的各组DCs瘤苗对自体CTL细胞分泌IFN-γ的刺激作用显著高于对照组(P<0.01)。对CD8+NKT细胞的体外增殖动力学观察结果显示,CD8+NKT细胞呈集落生长,在诱导第2至3周时,细胞增殖能力最强。CD3+C3356+、CD8+CD56+阳性细胞率随着诱导时间的延长而增高,诱导3周时达到高峰。
结论:1.用Her-2/neu癌基因蛋白复合物负载DCs,可促进DCs的CD80、CD86、CD83和HLA-DR表达。2.与体外构建的重组人Hsp70-Her2/neu癌基因蛋白复合物和重组人Her-2/neu癌基因蛋白负载的DCs比较,高表达Her-2/neu癌基因蛋白细胞株制备的Hsp70-Her2/neu癌基因蛋白复合物负载的DCs具有更高的成熟度。3.从健康人外周血中可大量诱导CD8+NKT细胞,且具有高度增殖能力。