基因重组是可用于基因克隆、基因修饰的一种分子生物学技术,操作简单而高效,对于基因表征的研究具有重要的价值和意义。本论文主要研究谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的基因敲除和重组工程介导的点突变。谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032及其衍生菌株是工业上用于生产氨基酸的重要生产菌株。染色体基因敲除的研究将有助于研究基因表征和蛋白质功能。为克服目前的方法效率低的问题,探索比较各系统的敲除效率,以期建立一个适用于谷氨酸棒状杆菌的高效简便基因编辑方法。首先,通过调节I-SceI基因之前的核糖体结合位点获得更高水平的基因表达。尽管打靶DNA片段通过重组工程成功替代了抗性基因,但第二步抗性基因的去除未能通过短同源臂介导的重组而实现。将同源臂延伸至1 kb后,由自杀载体介导的基因敲除成功实现了无痕敲除。高敲除效率显示了此法具有作为有效基因敲除策略的强大潜力。通过构建Cre诱导型表达载体和crtI2基因缺失载体,初步测试了另一种基因敲除系统——Cre/loxP介导的基因敲除系统。最后,构建了 IPTG诱导的recT-cas9基因表达载体,将用于单链DNA辅助的CRISPR/Cas9介导的染色体基因编辑。本论文的第二部分是重组介导的基因点突变的研究。选择N-乙酰神经氨酸醛缩酶基因nanA进行S208G和E192饱和诱导突变实验。将含有nanA基因的质粒pLS122和突变DNA片段共转化到重组工程的大肠杆菌细胞中诱使核苷酸发生突变。通过调整pLS122与突变DNA片段的摩尔比为1:1后,5位点的S208G突变效率从44.2%增加至79.73%。E192的饱和诱导突变,成功获得了 19种氨基酸;但通过许多试验无法获得天冬酰胺,表明该方法的局限性。同时我们发现同源臂的长度对突变效率没有明显的影响,而基于染色体的重组系统更适合点突变。需要进一步改进才能使重组工程介导的点突变成为一种稳健可行的基因修饰策略。