糖皮质激素与其胞浆受体拮抗剂对凋亡的嗜酸粒细胞转归的影响

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背景:嗜酸粒细胞是支气管哮喘发病机制中的主要效应细胞,与哮喘气道炎症、气道重塑及气道高反应性有关,因而清除嗜酸粒细胞对哮喘炎症的控制起着重要作用。研究表明肺部的嗜酸粒细胞可通过凋亡后被巨噬细胞或气道上皮细胞吞噬而被清除,由于它们是被完整地吞噬和清除,从而防止细胞内炎性介质和毒性内容物的泄漏,对哮喘炎症的控制具有重要意义。近年来研究表明糖皮质激素不仅可以促进嗜酸粒细胞的凋亡而且可以促进气道上皮细胞对凋亡的嗜酸粒细胞的吞噬,其可为哮喘的临床治疗提供新的思路,但其具体机制不明。凋亡细胞在体内的及时被吞噬,不仅是清除炎性细胞的有效方式,而且可以降低吞噬细胞本身的炎症状态。在吞噬凋亡的细胞后,巨噬细胞本身分泌的促炎性因子会下降,而抗炎因子的表达则上调。对于气道上皮细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞后本身释放促炎性因子是否下调值得我们进一步探讨。目的:探讨糖皮质激素及糖皮质激素胞浆受体拮抗剂RU38486对A549细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞的影响,观察糖皮质激素对吞噬作用的时间特征;并观察A549细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞后释放IL-6和IL-8的变化情况。方法:用磁细胞分离柱从正常人的外周静脉血中分离CD15阳性的嗜酸粒细胞。培养48小时后,通过形态学和AnnexinV-FITC凋亡试剂盒进行嗜酸粒细胞凋亡鉴定。将凋亡的嗜酸粒细胞加入到预先用地塞米松或RU38486处理的A549细胞中进行吞噬。吞噬结束后,凋亡的嗜酸粒细胞用邻联茴香胺进行过氧化物酶染色,A549细胞用苏木素加以胞核衬染。运用Olympus倒置显微镜及Diagnostic Instruments-Spot insight数字图象采集摄像系统动态观察吞噬现象。光镜下对已固定染色的细胞进行吞噬率统计。放射免疫法检测A549细胞上清中IL-6和IL-8的浓度。结果:1) A549细胞在地塞米松诱导后1小时吞噬能力开始升高,4小时吞噬能力达最高峰,8小时、24小时吞噬能力明显下降2)加入RU38486后抑制了地塞米松所增强的吞噬能力3)凋亡嗜酸粒细胞的吞噬并不能改变A549细胞释放IL-6和IL-8,但能抑制脂多糖刺激A549细胞后IL-6、IL-8的分泌4)地塞米松增加的吞噬也不激发A549细胞释放IL-6和IL-8结论:1)地塞米松促进A549细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞是通过A549细胞糖皮质激素胞浆受体发挥作用的,并且具有时间依赖性2) A549细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞能降低炎症反应,对哮喘炎症的控制具有重要意义
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