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目的：糖尿病性膀胱病是一种糖尿病并发的泌尿系统的疾病,主要由糖尿病的周围神经病变引起的膀胱功能障碍,与其病程、是否系统治疗及神经病变程度相关,而与性别、年龄无关。糖尿病膀胱神经病变主要累及支配膀胱的副交感神经(骶2、3、4)以及交感神经(胸11、12及腰1、2),引起排尿反射出现异常,膀胱收缩力减弱,导致尿潴留或尿淋漓不尽,甚至出现尿失禁。患者有下腹胀痛、尿频、尿急、尿痛而无力排尿等症状。膀胱内长期存在残余尿液易引起泌尿系的感染,导致肾功能出现损害,甚至发生肾功能衰竭。因此,糖尿病性膀胱病的早期诊断及治疗是十分非常重要的,其机制研究越来越受人们关注。近年来,发现胰岛素生长因子-1在神经元和肌肉中分布广泛,其化学结构与胰岛素相似,和其相应的受体结合而发挥作用,促进神经细胞和肌细胞的再生,抑制其凋亡,在神经元的生长、分化和能量代谢以及神经保护方面都起着重要的作用。本研究运用免疫组化的方法,检测胰岛素生长因子-1(IGF-1)在糖尿病大鼠膀胱和腰骶背根神经节组织中的表达变化,来探讨IGF-1在糖尿病性膀胱病的发生发展中的作用。方法：1实验的动物及分组：所用的动物为河北医科大学实验动物中心的35只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,体重为200-250g。随机分为两组,对照组为15只,糖尿病组20只；SD大鼠禁食12h以上(过夜),糖尿病组大鼠按60mg/Kg腹腔注射STZ,对照组大鼠按60mg/kg腹腔注射枸橼酸钠缓冲液；72h后测大鼠空腹血糖浓度(BG),BG>16.7mmol/L,11周后糖尿病组大鼠的空腹血糖浓度(BG)>16.7mmol/L,说明糖尿病大鼠并发膀胱病变。2标本的制作及免疫组化：大鼠麻醉后,分别取实验组和对照组大鼠膀胱及腰骶背根神经节,生理盐水冲洗一次,放入4%多聚甲醛(0.1MPBS,PH7.0～7.6,含0.1%DEPC)瓶中进行固定,取0.5cm×0.5cm×0.1cm组织块放入Citadel2000型脱水机进行脱水处理后,高温熔解固体石蜡,在模具内包埋组织块；免疫组化的试剂是采用河北博海生物工程开发有限公司分装美国SANTA CRUZ公司产品,按照说明书操作,具体步骤为：(1)将厚度5um的组织切片附于经多聚赖氨酸附膜的载玻片上,60℃过夜；(2)将切片放入二甲苯和酒精中脱蜡、入水(二甲苯中5分钟两次、100%乙醇5分钟两次、95%乙醇5分钟两次、90%乙醇5分钟两次、85%乙醇5分钟两次、75%乙醇5分钟两次)蒸馏水洗两次；(3)将切片放入柠檬酸抗原热修复液中,微波炉加热后冷却至室温(100%火力一分钟、20%火力一分钟、停一分钟,共四次),用蒸馏水冲洗；(4)加3%H202孵育10分钟,消除内源性过氧化物的活性,蒸馏水冲洗1次,0.1MPBS洗2次(每次5分钟)；(5)切片上滴加正常的山羊血清封闭液,在室温下放置20分钟。甩去多余的液体,不洗；(6)切片上滴加适当比例(1：300)的第一抗体,放在冰箱内4℃过夜,取出切片,0.1MPBS洗2次(每次5分钟)；(7)切片上滴加生物素化第二抗体(IgG),在37℃环境下放置20分钟,0.1MPBS洗2次(每次5分钟)；(8)切片上滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液(S-A/HRP),放在37℃环境下20分钟,0.1MPBS洗2次(每次5分钟),拭干；(9)DAB显色：DAB显色试剂盒加入1ml蒸馏水,再将显色剂A、B、C各一滴加入试剂盒内,混匀,加至标本上,显色1分钟(显微镜下观察显色效果),充分水洗；(10)苏木素复染细胞核1分钟,取出充分水洗,使其返蓝复染、脱水、烘干(1%盐酸酒精分化、1%胺水反蓝、充分水洗、经70%乙醇5分钟、80%乙醇5分钟、90%乙醇5分钟两次、95%乙醇5分钟两次、100%乙醇5分钟两次脱水、二甲苯透明5分钟两次)、中性树脂封片；(11)结果的观察：光学显微镜下观察,细胞核或细胞质内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞,根据着色强度和阳性细胞的百分比,选择实验组和对照组的阳性和阴性组织相,进行100×和400×的显微照相,读取数据。3统计学分析：应用SPSS13.0软件包,血糖结果采用均数±标准差表示,进行两个独立样本t检验,当P值<0.05时具有统计学意义；IGF在膀胱及DRG中的表达属于等级资料,需采用秩和检验,当P值<0.05时具有统计学意义。结果：1血糖的变化大鼠腹腔注射链脲佐菌素72h后,血糖明显升高(BG>16.7mmol/L),取材时,糖尿病组(n=19)的血糖明显高于对照组(n=15),两组属于计量资料,采用两个独立样本的t检验,对照组与糖尿病组比较(4.7333±0.61721vs29.52±1.62241),P=0.000,P值<0.05,统计学上有显著的差异,说明本实验STZ造模成功,结果见Table.1及Fig.1。2HE染色与免疫组化结果光镜下见大鼠膀胱逼尿肌结构如下：对照组大鼠膀胱移行上皮排列整齐,粘膜下及肌间神经丛多见,肌纤维整齐排列,肌束间排列紧密,肌间隙内充满结缔组织,肌细胞大小一致；糖尿病组大鼠粘膜下有炎细胞浸润,肌束排列紊乱、结构松散,肌间隙明显增宽,肌束间血管充血,逼尿肌细胞肥大,形态不规则。根据上述结果,说明糖尿病性膀胱病大鼠造模成功。免疫组化结果：IGF-1在膀胱粘膜下和膀胱逼尿肌细胞分布,与正常组相比,糖尿病表达明显下降；IGF-1在膀胱及DRG中的表达,结果属于等级资料,统计学上采用秩和检验,统计学结果如图表1所示：Mann-whitneyU统计量为49.000；WilcoxonW统计量为239.000；Z=-3.354,双侧检验P=0.001,按α=0.05标准,说明糖尿病组IGF-1在膀胱中的表达明显下调具有统计学意义；在腰骶背根神经节中,IGF-1主要分布在细胞浆内,与正常组相比,糖尿病组表达明显降低,统计学结果如图表2所示：Mann-whitneyU统计量为9.000；WilcoxonW统计量为54.000；Z=-2.911,双侧检验P=0.004,按α=0.05标准,说明糖尿病组大鼠IGF-1在腰骶背根神经节的表达明显下调有统计学意义。结论：本实验通过运用免疫组化的方法研究IGF-1在糖尿病大鼠膀胱及腰骶背根神经节的表达,结论如下：IGF-1在糖尿病大鼠的膀胱及腰骶背根神经节中表达均明显下调,在糖尿病性膀胱病的病变发生及发展中起着重要作用。