现阶段国内兽医临床上应用较多的麻醉药是速眠新,它属于神经安定镇痛剂,主要成分是双氢埃托啡、保定宁和氟哌啶醇。具有很好的镇静、镇痛和肌松作用,已广泛应用于各种动物的麻醉。麻醉药进入体内要进行生物转化,肝脏是生物转化的主要场所。药物在肝脏中的生物转化有赖于其微粒体中的多种酶系,其中最重要的是细胞色素P450混合功能氧化酶系统,其中的CYP3A和CYP2E1与麻醉药的代谢密切相关。目的:建立分离及培养原代大鼠和犬肝细胞的试验方法,并通过体外实验探讨麻醉药代谢的分子机理,为临床合理用药提供理论依据。方法:采用胶原酶二步灌流法灌注SD雄性大鼠肝脏,获取大鼠肝细胞,用含有多种辅助因子的Williams’E培养基进行培养,每天观察原代肝细胞的生长情况,并进行图像采集。并用不同浓度的速眠新及其主要成分保定宁处理大鼠肝细胞0.5-24h,Western Blot法检测肝细胞中CYP3A1和CYP2E1的表达。另外用不同浓度的速眠新、保定宁分别与地塞米松联合应用处理大鼠肝细胞0.5-24h,Western Blot法检测肝细胞中CYP3A1和CYP2E1的表达。还通过上述方法获取并培养犬的肝细胞,用不同浓度的速眠新、保定宁、氯胺酮处理犬肝细胞1-4h,及这三种药分别与地塞米松联合应用处理肝细胞1-4 h,用Western Blot法检测犬肝细胞中CYP450的表达。结果:每只大鼠可获得2-4×108个肝细胞,犬的肝细胞相对较多。它们的成活率都在95%左右,培养的肝细胞形态完整、生长良好,可用于药物代谢的研究。速眠新、保定宁对大鼠肝细胞CYP3A1和CYP2E1均具有诱导作用。在作用12h情况下,2%速眠新和0.4%保定宁是CYP3A1和CYP2E1表达的最佳剂量。速眠新、保定宁与地塞米松分别联用。在作用6h情况下,1%速眠新是CYP3A1和CYP2E1表达的最佳剂量。在作用12h情况下,0.02%保定宁是CYP3A1和CYP2E1表达的最佳剂量。不同浓度的速眠新对犬CYP450的诱导作用在2h时0.015%的浓度表达最明显。保定宁浓度为0.05%,作用2h时表达最明显。氯胺酮作用肝细胞2h,浓度为0.2%时表达最明显。氯胺酮与速眠新联合应用作用肝细胞2h,在浓度为0.025%时表达最明显。速眠新与地塞米松合用作用犬肝细胞2h浓度为0.004%时表达最明显。保定宁与地塞米松合用作用肝细胞2h,浓度为0.04%对CYP450的诱导作用最明显。氯胺酮与地塞米松合用作用肝细胞2h,浓度为0.04%时表达最明显。结论:通过胶原酶二步灌流法可获得大量大鼠和犬的肝细胞,而且存活率高,这为麻醉药的临床药理试验提供了很好的试验材料。通过Western Blot等方法,检测出了速眠新在不同情况下的最佳用药剂量,这为它的临床合理应用提供了依据。