喉癌是人类常见的癌症之一,鳞状细胞癌是最主要的病理类型。当前治疗手段主要包括手术、化疗和放疗等综合措施,治疗效果在很大程度上依赖于早期诊断和早期治疗,晚期患者预后较差。因此,开发新的治疗方法具有重要的意义。micro RNA是一类非编码的单链小分子RNA,能够通过类似“癌基因”或者“抑癌基因”的作用以及其他方式参与肿瘤的发生发展。肿瘤免疫耐受提示机体免疫系统不响应肿瘤抗原的刺激,从而使肿瘤细胞逃避免疫监视。免疫细胞受到某些特定因素的影响,能够产生免疫调控因子,对肿瘤免疫耐受起到重要作用。本研究以hsa-mi R-193b为研究对象,对其在喉鳞癌中的表达以及通过促进IL-10表达的单核细胞参与肿瘤免疫耐受的过程进行研究。研究目的1.研究mi R-193b在喉鳞癌组织中的表达情况;2.研究mi R-193b对喉鳞癌细胞的增殖、凋亡、迁移及细胞周期等生物学功能的影响;3.研究免疫相关因子IL-10、CD14、CD68在喉鳞癌组织中的表达,并结合相关临床病理参数分析其临床意义;4.探讨喉鳞癌组织中的mi R-193b对肿瘤免疫调节的作用。研究方法1.利用q RT-PCR研究mi R-193b在喉鳞癌组织以及喉鳞癌细胞中的表达;2.利用MTT法检测mi R-193b对喉鳞癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测mi R-193b对细胞周期以及凋亡的作用,Transwell检测细胞迁移能力;3.采用免疫组化方法对IL-10、CD14、CD68在喉鳞癌组织中的表达进行研究,并探讨三者与临床病理参数之间的关系;4.利用q RT-PCR检测mi R-193b在喉鳞癌细胞培养基上清液中的表达;5.免疫磁珠分选、流式细胞仪分析喉鳞癌组织分离的免疫细胞中IL-10阳性细胞的表达以及分型;6.利用细胞转染、流式细胞仪、ELISA分析mi R-193b诱导生成的IL-10阳性的单核细胞对免疫细胞活性的影响;7.数据录入SPSS20.0统计软件,采用多种统计学方法对实验结果进行分析。研究结果1.在喉鳞癌组织中mi R-193b的表达显著上调,差异显著具有统计学意义;2.mi R-193b能够促进喉鳞癌细胞的增殖、迁移,抑制细胞凋亡,转染mi R-193b抑制剂后细胞周期被阻滞在G1/S期;3.喉鳞癌组织中IL-10、CD14、CD68的表达分别与临床分期、T分期明显相关,IL-10、CD14还分别与淋巴结的转移有关,CD68与病理分化程度相关。IL-10和CD14在喉鳞癌组织中的表达呈正相关。4.mi R-193b在喉鳞癌细胞培养基上清液中的表达显著提高;5.喉鳞癌组织分离出的免疫细胞中检测到IL-10阳性的细胞,大部分为单核细胞;6.mi R-193b能够诱导原始单核细胞形成IL-10阳性的单核细胞;7.IL-10阳性的单核细胞能够降低CD8+CD25-T细胞的增殖,并抑制其细胞毒性细胞因子穿孔素和颗粒酶B的表达。研究结论1.mi R-193b在喉鳞癌组织中表达上调,能够促进喉鳞癌细胞的增殖、迁移,抑制细胞凋亡,起到“癌基因”的作用;2.喉鳞癌组织中IL-10、单核细胞、肿瘤相关巨噬细胞的浸润程度与肿瘤的进展程度相关,IL-10的表达与单核细胞有一定关系;3.喉鳞癌组织中IL-10阳性单核细胞的形成与mi R-193b的表达上调有关,mi R-193b能够促进IL-10阳性单核细胞的表达,IL-10阳性的单核细胞可以抑制CD8+T细胞的免疫活性,使得喉鳞癌细胞逃脱免疫监管,促进肿瘤发生发展。