RASSF1A基因在喉癌前病变和喉鳞状细胞癌变阶段性发生及发展过程中转录表达以及临床应用的研究

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目的研究喉癌前病变和喉鳞状细胞癌组织细胞的抑癌基因RASSF1A的表达情况,并分析抑癌基因RASSF1A转录表达、蛋白表达与喉鳞状细胞癌变过程中临床病理因素之间的关系。方法 本实验取59例喉部病变的患者,其中9例为炎性息肉(Inflammatory polyps)作为正常对照,其余50例为喉癌变过程中不同病理时期的新鲜手术切除标本。喉癌前病变及喉癌组织标本分为喉角化症(Keratosis of the Larynx)10例、喉乳头状瘤(成人)(papilloma of the Larynx)10例、高级别上皮内瘤样变(Ⅲ级,重度不典型增生,high grade dysplasia, HGD)15例、喉鳞状细胞癌(LSCC)15例。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Quantitative RT-polymerase chain reaction, RT-PCR)以及western blotting和免疫组织化学SP检测喉部炎性病变、喉角化症、喉部重度不典型增生、喉乳头状瘤及喉鳞癌状细胞组织中RASSF1A基因的mRNA转录表达以及蛋白质表达,统计RASSF1A基因表达缺失的发生率及其与临床资料相关性,明确RASSF1A基因在喉癌变过程中的重要作用。结果:在RT-PCR反应中我们发现,RASSF1A转录本在喉炎性息肉组织中均有表达;RASSF1A转录表达随着上皮异常增生程度或不典型增生的加剧,呈现逐步减弱趋势。喉息肉、喉角化症及喉乳头状瘤组相比,差异无统计学意义(P>0.05),但重度不典型增生组织与息肉、角化症及乳头状瘤组比较,差异有统计学意义(p<0.05);喉鳞状细胞癌组织与息肉、角化症及乳头状瘤组比较,差异有统计学意义(p<0.01)。RASSF1A基因Western-blot灰度分析和免疫组织化学SP法分析结果显示,RASSF1A基因蛋白在喉炎性息肉组织中均有表达,在喉癌变过程中不同病理组织有不同程度的表达。RASSF1A蛋白表达随着喉黏膜癌变程度不断地加剧,呈现逐步减弱趋势,与mRNA转录表达相似。结论:抑癌基因RASSF1A在喉癌前病变和喉鳞状细胞癌的癌变过程中表达水平呈进行性下调。RASSF1A的表达缺失可以很好地预测喉癌前病变癌变的风险性。而Real-Time RT-PCR和Western-blot法以及免疫组织化学SP法可以有效地检测出RASSF1A的表达情况。具有更准确的检测RASSF1A基因的mRNA转录表达以及蛋白质表达与异常增生程度之间的关系,以及预测癌变危险程度分子水平的一个指标,并利用免疫组化方法检测RASSF1A基因表达的相关联系,使得检测RASSF1A基因的表达具有科学依据并指导临床治疗有重要意义和应用前景。
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