论文部分内容阅读
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种呈世界性分布的专性细胞内寄生的机会性致病原虫,可引起人兽共患的弓形虫病。正常人感染弓形虫后多呈无症状带虫免疫状态,但免疫力低下的人群(如肿瘤患者、AIDS病人、器官移植病人等)感染后,可引起严重的后果甚至死亡。孕妇感染弓形虫可通过胎盘垂直传播,引起早产、流产、死胎或婴儿发育畸形等。近年来,随着肿瘤患者、AIDS病人及宠物饲养爱好者的逐渐增多,弓形虫的危害也日益突出,但至今仍无治疗弓形虫病的安全有效药物,因此深入了解其致病机制对于弓形虫的防治具有重要意义。弓形虫致病的首要步骤是对宿主细胞的入侵及在宿主细胞内的快速增殖,但迄今为止,人们对入侵和增殖的机制尚未明了。已有的研究表明弓形虫SRS(SAG1-related sequence)蛋白超家族在其中起了重要作用,而SAG3是SRS蛋白超家族中非常重要的一员,其在速殖子、缓殖子及子孢子等多个时期均有表达,且具有较低的免疫原性。虽然已有的研究显示SAG3参与虫体的入侵及增殖,但是目前关于SAG3的研究极少,其在弓形虫致病中的作用和地位并不知晓,因此深入研究SAG3的功能将为研究阐明弓形虫致病机制提供科学资料。研究目的:本研究利用RNAi技术,研究弓形虫SAG3对虫体入侵和增殖能力的影响,以期能深入了解表面抗原SAG3的功能,为阐明弓形虫致病机制提供科学资料。研究内容:1、弓形虫SAG3对虫体入侵的作用:用电穿孔的方法将针对SAG3基因3’-UTR区的dsRNA转入弓形虫速殖子体内,转染后的虫体感染Hela细胞,分别于转染后5min、30min、1h和2h提取细胞虫体的总RNA,并用半定量RT-PCR方法分析与弓形虫入侵密切关的MIC2、ROP2和GRA2三个基因的表达量的变化,同时设立无相关对照组(GFP),电转条件对照组和正常对照组。2、弓形虫SAG3对虫体增殖的作用:用电穿孔的方法将SAG3基因3’-UTR区和CDS区的dsRNA转入弓形虫速殖子体内,转染后的弓形虫感染Hela细胞,分别于转染后12h、24h和48h提取细胞虫体的总RNA并用半定量RT-PCR方法分析弓形虫嘌呤补救合成途径中AK、HXGPRT两个关键酶基因的表达量的变化,同时设立无相关对照组(GFP),电转条件对照组和正常对照组。研究结果1)转染SAG3基因dsRNA的弓形虫感染Hela细胞后,MIC2、ROP2和GRA2的表达量均低于对照组。2)转染SAG3基因dsRNA的弓形虫感染Hela细胞后,AK和HXGPRT的表达量低于对照组。结论:弓形虫SAG3基因的表达被抑制后,弓形虫的入侵和增殖能力明显减弱,说明SAG3可能在弓形虫致病中起着重要的作用,为深入了解表面抗原SAG3基因的功能、阐明弓形虫入侵宿主的致病机制奠定了基础。