从人胎盘中提取总RNA，利用RT-PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体（M-CSFR）胞外区的，具有全部配基结合活性区域的前三个免疫球样蛋白结构域（D1-3）cDNA[Wang et al，Mol Cell Biol，13：5348-59，1993]，经平端连接将其克隆到原核表达载体pET-28a的His-Tag下游，转化大肠杆菌BL21（DE3）后，经IPTG诱导，D1-3在宿主菌中获得高效表达，表达量约占菌体总蛋白的46％。重组蛋白经Ni²⁺组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化，获得了纯化的D1-3，经SDS-PAGE显示为单一区带，其表观分子量为34kDa。当D1-3终浓度分别为1、0.1及0.01μM时，可以抑制白血病细胞系J6-1的集落形成，具有明显的生物学活性。将D1-3免疫家兔获得了高效价的抗D1-3血清，并纯化得到抗rhM-CSFsR的IgG。用酶联免疫吸附分析（enzyme-linked immunosorbent assay，EIA）和Scatchard分析证明了D1-3有明显的M-CSF专一结合活性，kd值为7.8nM，只有一个M-CSF结合位点。在此基础上，进一步扩增、克隆并在大肠杆菌中表达了重组蛋白D2-3和D3。D2-3和D3的表观分子量约分别为25、14kD。经Ni²⁺组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化，EIA和Scatchard分析表明，D1-3结合M-CSF的能力是重组D2-3的3倍，前者的kd为11nM，后者的为39nM。而重组的D3则完全没有结合能力。这些数据提示M-CSFR配基结合区的可能模型为：D2-3是配基结合的主体位点，D1为其配基结合的辅助位点，可能对配基结合位点的刚性也有贡献。为了验证该模型，将大肠杆菌中表达的相应功能区DⅢ、DⅡ-Ⅲ、DⅠ-Ⅲ克隆到杆状病毒载体pbluebac4.5中，与杆状病毒DNA一同转导昆虫细胞St9。经过2轮筛选，获得了纯化的重组病毒，再用重组病毒分别感染昆虫细胞，Western blot检测证明DⅡ-Ⅲ和DⅠ-Ⅲ得到了表达，DⅠ-Ⅲ是分泌到上清液中的糖基化蛋白，DⅡ-Ⅲ为滞留于胞浆中的糖蛋白。Western blot分析了不同时间点的DⅠ-Ⅲ、DⅡ-Ⅲ样品，DⅡ-Ⅲ和DⅠ-Ⅲ的表达量在96-120h时达到最大量。将抗D1-3的