肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,每年的新增肝癌病例及肝癌致死数均约为70万,其中约半数发生在中国。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)持续感染是HCC发生的主要致病因素。HBV X基因(HBX)编码的HBx蛋白具有多种生物学功能,参与病毒的复制,宿主基因表达的调控,细胞周期的调控,信号通路的激活等,并在HBV的有效感染以及HCC的发生和发展过程中发挥重要的作用。由于HBV DNA聚合酶缺乏严格的校正机制,所以HBV在宿主细胞中的复制过程中存在较高的碱基错配率,导致HBX的突变频率较高。HBV复制的这一特点,使得不同来源的HBX基因的序列并不完全相同。在本项研究中,我们通过对较大样本进行HBX基因测序和数据统计,一方面,较为系统和全面地描述了在人肝癌组织和癌旁正常组织中HBX基因的序列特征,寻找疾病相关的点突变、缺失和插入等形式的序列改变,并结合病历资料对测序结果进行进一步的分析。我们共对287例HCC患者肝癌组织和205例癌旁正常组织进行基因组DNA的抽提和HBX基因的扩增,并对PCR产物进行测序检测。其中,经过对HCC癌组织和癌旁正常组织中PCR获得的HBX基因进行序列的测定。在HCC肝癌组织中HBX基因PCR阳性率为66.90%(192/287),癌旁正常组织中PCR阳性率为72.68%(149/205)。通过DNA测序,在肝癌组织中我们得到了169条HBX的序列,其中包含40.24%(68/169)的截短序列和8.88%(15/169)的存在碱基插入的序列,在癌旁组织中获得117条HBX序列,其中包含20.51%(24/117)的截短序列和7.69%(9/117)的存在碱基插入的序列,我们对所得序列进行整理分析后发现,癌和癌旁中的序列均存在三种类型的突变形式,截短突变(包括N-端和C-端突变),插入突变和点突变。我们结合病历资料分别对这三种情况在癌和癌旁中的差异进行了讨论,发现癌组织中的C-端截短突变数显著高于癌旁组织(χ2=4.23,P=0.040),且在有肝硬化的患者的癌中分布显著高于癌旁组织(χ2=4.59,P=0.032)；插入突变在癌和癌旁中的检出率差别不大,插入的类型较多,但均未见文献报道,且插入突变只在血清AFP水平高于20(ng/m1)的分组中检出(χ2=10.12,P=0.006)；点突变率很高,且突变情况复杂,并未发现单个核苷酸或氨基酸位点的突变在癌和癌旁中差异显著,但是在男性分组的患者中,我们发现在男性患者中发现43、47、127、131、132位氨基酸种类的改变在男性癌和癌旁中差异显著,且多涉及氨基酸的亲疏水性变化。进一步对氨基酸的亲疏水性进行对比分析,发现40、43、47、127、130、132位氨基酸亲疏水性的变化在男性癌和癌旁中差异显著。且40位点氨基酸的亲疏水性的改变在全部癌和癌旁序列中存在显著差异(χ2=5.04,P=0.033)。且47位点在TNM临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期病人癌组织中氨基酸亲疏水性的分布存在显著差异(χ2=7.00,P=-0.030),疏水性氨基酸的比例随着TNM临床分期级数的增加而逐渐增加,同样,位于HBx C-端的127位点的氨基酸种类(χ2=12.64,p=-0.002)和氨基酸亲疏水性(χ2=13.60,P=0.001)变化在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期病人的癌组织中分布均有显著差异,疏水性氨基酸的比例随着TNM临床分期级数的增加而逐渐减少。132位点氨基酸种类变化(phe/tyr)在肝癌不同分化程度的男性病人组织中的分布存在显著差异,且疏水性氨基酸的比例随分化程度的增加而逐渐增高。此外,132位点不同氨基酸分布在HBsAg阴性和阳性的患者癌组织中存在显著差异(χ28.28,p=-0.004),亲水性氨基酸tyr只存在HBsAg阴性患者癌组织中,比例为16.67%。所以我们认为C-端截短突变、插入突变以及某些特定的点突变可能通过不同的途径,在不同程度上和肝细胞的癌变相关。