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香蕉是世界上重要的水果之一,为水稻、小麦和玉米之后的第四大粮食作物,具有很大的经济价值。目前共有120多个国家和地区种植香蕉。但是近年来低温冷害时有发生,病害逐年加重,使得广大蕉农遭受巨大的经济损失。因此,培育出具有抗寒、抗病特性的优质香蕉品种,以解决生产上寒害、病害的威胁,已成为世界香蕉产业所面临的迫切问题。而大多数香蕉栽培种属于三倍体,具有高度的不育性,不产生种子,因此传统的育种方法在培育优质蕉种方面难有成效。但是利用现代生物技术,通过物理、化学等诱变因素诱发植物基因突变,扩大遗传变异,从而进行香蕉的遗传改良,有望解决上述问题。
针对以上问题,本论文以目前广为栽种的巴西香蕉(Musa AAA Cavendish cv.Brazil)试管苗为材料,在已建立的假茎薄片外植体植株再生体系的基础上,使用化学诱变剂甲基磺酸乙酯(EMS,Ethyl methyl sulphonate)对其假茎茎段进行处理,然后通过薄片诱导植株再生体系,希望能从再生植株中筛选出具有抗寒或抗巴拿马病特性的再生植株。
在用EMS对巴西香蕉假茎茎段进行诱变处理的过程中,设置了0,50mM,100 mM,200 mM,300 mM,400 mM6个浓度处理和30 min,60 min,120 min3个时间处理。实验结果表明,随着诱变剂浓度的升高和处理时间的增加,假茎薄片外植体的成活指数和芽诱导指数都呈现下降的趋势,而以300 mM EMS处理60min为合适的处理组合。
EMS处理后的假茎薄片外植体置于芽诱导培养基上培养,4周后统计假茎薄片外植体的成活指数和芽诱导指数,分别为0.16和2.18。然后将诱导出的芽转入芽增殖培养基中培养7d,挑选出较粗壮的芽转入生根培养基培养4周使其成长为小植株,最后通过炼苗和过渡移栽,总共获得了150棵再生植株。实验中所用的芽诱导培养基的组成为MS基本盐,附加11种氨基酸和维生素溶液、10μMBAP、1μM IAA、50μM KT、30g/L蔗糖、10g/L葡萄糖和0.65﹪琼脂粉。芽增殖培养基的组成为MS基本盐,附加1μM BAP、1μM NAA、30g/L蔗糖和0.65﹪琼脂粉。生根培养基的组成为MS基本盐,附加1μM NAA、30g/L蔗糖、0.1﹪活性碳和0.65﹪琼脂粉。
本论文对其中的100棵再生植株进行了抗寒性的筛选。先将对照和再生植株置于7℃下低温胁迫处理24h,然后置于温室(25℃左右)中恢复生长2d,最后筛选得到2棵抗寒性较高的再生植株,分别为再生植株IV-66和再生植株V-89。其中对照植株经低温胁迫处理后,叶片萎蔫现象严重,恢复生长后,萎蔫的叶片由于不能完全恢复生长而形成褐斑:而筛选得到的抗寒性较高的2棵再生植株经低温胁迫处理后,叶片只有轻度的萎蔫现象,恢复生长后,受寒害的叶片基本上都可恢复生长。此外,常用的抗寒生理指标相对电导率和过氧化物酶(POD)活性的测定表明,再生植株IV-66和再生植株V-89的相对电导率分别比对照低13.7﹪和14.6﹪,其POD活性则分别比对照高35.7﹪和65.4﹪。
此外,本实验还用伤根浸菌法对50棵再生植株进行了抗巴拿马病的筛选。筛选结果显示,并未发现具有抗病特性的植株。