马鞭石斛黄酮提取工艺优化及抗氧化活性研究

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随着生活水平的提升,人们对现代园林景观的功能有了更多的要求,除了传统的游憩、观赏的功能外,园林更是担负着维护公共健康的责任。从保健型园林的构建到“园艺疗法”的兴起,这些都反映了人们在进行园林创建的时候已把人们的身体和心理需求放在了同等重要的地位,作为构建养生保健型园林的基础,具有保健作用的园林植物引起了人们越来越多的关注。石斛属是兰科中的一个大属,因其花色艳丽多彩,姿态优美,花期长,并且耐插耐贮,在园林中已得到广泛应用。除具有重要的观赏价值以外,石斛还具有多种保健作用,因而被人们称作神仙草,在《神农本草经》中被列为上品而常常作为药用。马鞭石斛是《中国药典》(2005版)明确收录的五种药用石斛之一,其药用价值更为突出。然而人们对其重要的次生代谢产物黄酮的开发利用还处于起步阶段。因此,对马鞭石斛黄酮进行提取工艺及活性的研究具有重要的意义。本文主要对马鞭石斛黄酮的提取工艺进行优化,并初步探讨其纯化工艺及其体外抗氧化活性。本实验采用溶剂回流法提取黄酮,单因素实验结果表明提取温度,料液比和乙醇浓度对黄酮的提取有显著的影响。通过效应面设计优化,得到了最优化的提取条件为:提取温度87℃,料液比3411,乙醇浓度73%。在这个最优条件下计算得到的期望提取率为4.63mg/g。在最优条件的验证试验中得到的实际黄酮平均提取率为4.52±0.02mg/g,这和预期的4.63mg/g相吻合。对马鞭石斛黄酮粗提物进行还原性测定,清除DPPH自由基的测定,清除ABTS自由基的测定和清除羟自由基的测定。结果显示,黄酮粗提物对ABTS和DPPH自由基的清除效果是明显的。当黄酮样品的浓度达到0.8mg/mL时,对ABTS的清除率能够达到100%。当样品浓度达到6.4mg/mL时,对DPPH的清除率能达到84.56%。当浓度为6.4mg/mL时其还原性能达到1.25,对羟自由基的清除率为51.05%。实验结果显示马鞭石斛黄酮具有较好的体外抗氧化活性。用AB-8大孔树脂对马鞭石斛黄酮的粗提物进行初步纯化,分别用蒸馏水、80%的乙醇进行洗脱,最后收集洗脱液,将洗脱液真空烘干得到经初步纯化后的马鞭石斛黄酮样品。检测发现纯化后马鞭石斛黄酮的纯度提高了6.44%,这说明大孔树脂对马鞭石斛黄酮的纯化具有明显的效果。对经初步纯化后的黄酮样品进行抗氧化活性测定,结果显示其体外抗氧化活性显著增强。当浓度为6.4mg/mL时其还原性能达到1.975。当样品浓度达到0.4mg/mL时,其对ABTS自由基的清除率即能达到100%,与纯化前相比其清除能力显著增强。样品浓度为6.4mg/mL时,对DPPH自由基的清除率为89.86%。当样品浓度为6.4mg/mL时对羟自由基的清除率为60.33%。
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