酸枣仁皂苷的分离纯化及生物活性研究

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酸枣(Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chow)为鼠李科枣属植物,酸枣仁是酸枣的种子,既是传统中草药也是药食同源品种。现代药理学研究表明酸枣仁具有较好的安神催眠活性,其主要有效成分为酸枣仁皂苷类物质,目前关于酸枣仁皂苷安神催眠的报道有很多,但对其他活性研究还较少。本论文以酸枣仁皂苷为研究对象,利用波谱学手段鉴定了酸枣仁皂苷成分,并对其抗氧化、抗肿瘤、降血糖、抗衰老、安神催眠活性经行了初步探究。(1)利用加热回流提取,有机溶剂分级萃取以及大孔树脂纯化后得到酸枣仁一级皂苷(SZR Ⅰ)和酸枣仁二级皂苷(SZR Ⅱ),SZR Ⅰ皂苷含量为52.1%,SZR Ⅱ皂苷含量为72.1%。利用红外光谱分析与液质联用分析,结果表明SZR Ⅰ与SZR Ⅱ的成分存在差异,SZR Ⅰ中含有白桦脂酸、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素,SZR Ⅱ中含有酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素、酸枣仁皂苷B1。(2)对SZR Ⅰ与SZR Ⅱ的抗氧化活性与抗肿瘤活性进行探究,SZR Ⅰ与SZR Ⅱ有一定的抗氧化效果且SZR Ⅱ的抗氧化效果优于SZR Ⅰ;SZR Ⅰ与SZR Ⅱ几乎没有抗肿瘤效果。(3)降血糖实验结果显示SZR Ⅰ与SZR Ⅱ对α-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶有较强的抑制作用。同时,SZR Ⅰ与SZR Ⅱ能改善Hep G2细胞的胰岛素抵抗,这可能与酸枣仁皂苷A和斯皮诺素有关。进一步探究表明,SZR Ⅰ与SZR Ⅱ可以提高超氧化物歧化酶(SOD)活力,降低丙二醛(MDA)含量,同时还可以提高己糖激酶(HK)与丙酮酸激酶(PK)的活力。(4)以人永生化表皮细胞Hacat探究SZR Ⅰ与SZR Ⅱ的抗光老化作用,结果表明SZR Ⅰ与SZR Ⅱ能促进紫外损伤的Hacat细胞的增殖,其单体化合物中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素也表现出相似作用,深入研究发现,它们均能降低细胞中活性氧(ROS)水平与人金属基质蛋白酶(MMP-1)的释放量,提高过氧化氢酶(CAT)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力。以秀丽隐杆线虫为模型的试验表明,SZR Ⅰ与SZR Ⅱ能延缓热应激与氧化应激导致的线虫衰老,这可能与它们能提高SOD与CAT活力有关。(5)SZR Ⅰ与SZR Ⅱ对皮质酮诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y损伤具有保护作用。以氯苯并氨酸(PCPA)诱导的ICR小鼠失眠模型探究SZR Ⅰ与SZR Ⅱ的安神催眠作用。研究表明,SZR Ⅰ与SZR Ⅱ能增加失眠小鼠的睡眠时间,减少睡眠潜伏期时间。进一步实验表明,SZR Ⅰ与SZR Ⅱ能增加失眠小鼠血浆中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去肾上腺素(NE)、白细胞介素IL-Iβ和一氧化碳氮(NO)含量,降低谷氨酸(Glu)和白细胞介素IL-6。RT-q PCR与western blot结果表明,SZR Ⅰ与SZR Ⅱ可能是通过调节5-HT1A、5-HT2A、GABAARα2、GABAARα3、IL-1β、IL-6 m RNA表达与蛋白表达而发挥安神催眠作用。
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