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目的: 初步探究TRIM11在结直肠癌组织或细胞内表达情况,及其对5-FU敏感性的影响。 方法: 1.收集结直肠癌患者术后新鲜癌组织及其对应癌旁正常组织标本,选用qRT-PCR(荧光定量PCR)检测TRIM11mRNA的表达量。 2.分别培养11种结直肠癌细胞株,选用qRT-PCR检测各肿瘤细胞内TRIM11mRNA的表达量。 3.构建 pSin-TRIM11质粒载体,利用慢病毒转导技术转染结直肠癌细胞DLD-1,构建过表达 TRIM11细胞系(即DLD-1-TRIM11组),转染pSin/neo为空白质粒对照组(即DLD-1-vector组),最后通过 western blot鉴定DLD-1-TRIM11组TRIM11蛋白被成功过表达。 4. DLD-1-TRIM11组和DLD-1-vector组分别加入不同浓度5-FU处理24h后,行CCK-8检测细胞活力。 5.150ug/ml的5-FU分别作用两组细胞24h后,行流式细胞术检测细胞凋亡率。 6.利用生物信息学软件TargetScan对TRIM11调控的miRNAs进行预测。 结果: 1.组织qRT-PCR显示:7例组织标本中,有5例TRIM11mRNA表达量在结直肠癌组织中显著低于其对应癌旁正常组织(P<0.05)。 2.细胞qRT-PCR显示:在11种结直肠癌细胞株中,TRIM11mRNA表达量各不相同,其中HT29表达量最高,而DLD-1表达量最低。 3.与DLD-1-vector组比较,TRIM11蛋白水平在DLD-1-TRIM11组细胞中显著性提高(P<0.05)。 4.CCK-8结果显示:DLD-1-TRIM11组细胞活力显著低于 DLD-1-vector组(P<0.05),DLD-1-TRIM11组半数抑制率(IC50=13.94ug/ml)明显低于DLD-1-vector组(IC50=110.24 ug/ml)。 5.流式细胞术结果显示:DLD-1-TRIM11组细胞凋亡率明显高于DLD-1-vector组(P<0.05)。 6.TargetScan软件预测:miR-9也许能靶向调控TRIM11。 结论: 1.利用慢病毒转导技术转染结直肠癌细胞DLD-1,pSin-TRIM11质粒载体能显著性提高TRIM11的蛋白表达。 2.在结直肠癌细胞 DLD-1中过表达 TRIM11时,可能提高 DLD-1细胞对5-FU的敏感性。