【摘 要】
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目的采用脂质体法将抗人血管内皮生长因子(VEGF)发卡状核酶转染肝癌细胞,研究抗人VEGF发卡状核酶对肝癌细胞SMMC-7721生物学特性和裸鼠肝癌移植瘤的影响。方法合成针对人VEGF
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目的采用脂质体法将抗人血管内皮生长因子(VEGF)发卡状核酶转染肝癌细胞,研究抗人VEGF发卡状核酶对肝癌细胞SMMC-7721生物学特性和裸鼠肝癌移植瘤的影响。方法合成针对人VEGF的发卡状核酶(以下简称RZ),定向克隆于真核表达载体pcDNA3.1+中;经双酶切和测序鉴定后,用脂质体法将pcDNA3.1+/RZ转染SMMC-7721肝癌细胞,经G418(500μg/ml)加压筛选获得抗性细胞株,基因组DNA法和RT-PCR法鉴定其在肝癌细胞内的表达;MTT法分析RZ对SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响,半定量RT-PCR法和ELISA法观察对SMMC-7721肝癌细胞VEGF表达的影响;用FCM分析其对SMMC-7721细胞凋亡的影响。接种RZ组和空载体组肝癌细胞于裸鼠皮下,观察成瘤时间、肿瘤体积和重量变化,免疫组化法观测肿瘤组织微血管变化及VEGF表达变化。结果获得pcDNA3.1+/RZ重组真核表达载体和SMMC-7721/RZ转基因细胞。RZ能明显下调SMMC-7721肝癌细胞VEGF的表达,减慢其增殖速率,诱导一定程度的细胞凋亡,使肝癌移植瘤组织VEGF表达水平明显下降,瘤体积变小,重量减轻,瘤组织血管密度减少。结论抗人VEGF发卡状核酶基因能够降低肝癌VEGF的表达,能够抑制肝癌细胞的生长,诱导细胞凋亡,并可减少肿瘤组织血管的形成,为进一步开展基因治疗提供实验依据。
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