心肌梗死(myocardial infarction，MI)是影响人类生活质量的一类重要疾病。近年来，随着人们生活水平的提高和人口老龄化，其发病率明显升高。急性心肌梗死后，由于局部心肌组织缺血、缺氧，心肌细胞大量坏死，纤维组织增生，疤痕组织形成，心室重塑(ventricular remodeling，VR)，心功能下降，晚期常出现难治性心力衰竭(refractory heart failure)。目前的治疗主要针对挽救濒死心肌细胞，增强存活心肌细胞的功能；阻断神经内分泌系统，阻断心室重塑。由于心肌细胞不能再生，心肌疤痕组织不能修复为新的心肌组织，但通过细胞移植可以增加梗死区心肌细胞数量，从而为心肌梗死的治疗提供新的策略。近十年来，国内外学者做了大量细胞心肌成形术(cellular cardiomyoplasty，CCM)方面的工作，胚胎干细胞(embryonic stem cells)、胚胎心肌细胞(fetal cardiomyocytes)、骨骼肌成肌细胞(skeletal myoblasts)及自体心肌细胞(autologous cardiomyocytes)的心肌内移植研究取得了很大进展。由于供体细胞来源、异体细胞移植引起的免疫排斥反应及移植细胞与宿主心肌细胞的连接等问题，目前还不能确定进行细胞移植的最佳细胞类型。骨髓单个细胞(Bone Marrow Mononuclear Cells，BMMNCs)中含有大量多能干细胞，国外学者发现经体外诱导后骨髓干细胞可分化为肌源性细胞(myogenic cells)或心肌细胞。本研究观察同基因骨髓单个核细胞经冠状动脉植入心脏后的存活、分布及分化状况，为自体骨髓单个核细胞移植进行心肌再生的临床应用提供实验依据。 军医进修学院硕十学位论文 方法:1.密度梯度离心法分离、纯化LewiS大鼠骨髓单个核细胞，并以PKH26红色荧光染料作为示踪剂进行标记;用光学显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪检测骨髓单个核细胞PKH26红色荧光标记效果。2.在同系LewiS大鼠颈部异位心脏移植模型基础上，以液氮冷冻法制备了急性心肌梗死模型;观察移植心脏的搏动情况，术后1天组织病理学检查建模效果。3.心肌梗死后2天，经移植心冠状动脉移植PKH26标记的同基因骨髓单个核细胞;细胞移植后7天，采集标本，检测植入细胞存活、分布及分化状况。 结果:1.经分离纯化后骨髓单个核细胞数量为2.1 xl护，骨髓单个核细胞的细胞膜被标记红色荧光，标记阳性率为84.99%，台盼蓝拒染率95%，表明PKH26标记细胞效果良好，细胞活性良好。2.供体心脏冷冻区形成边界清楚的白色圆盘形硬斑，血流开放后冷冻区运动功能障碍，梗死心复跳率94%，受体存活率76%;移植心脏病理切片苏木素一伊红染色显示梗死区心肌细胞变性坏死，炎症细胞浸润明显，与正常心肌组织界线较为清楚。3.细胞移植后7天，采集标本检测，PKH26红色荧光阳性细胞主要集中于移植心脏的冷冻梗死区，脾脏、骨髓也可见少量阳性细胞分布，非梗死区及其余脏器组织切片均未见红色荧光阳性细胞;梗死区内标记细胞大部分表达CD34;梗死区内connexin43的表达明显高于对照组。 结论:供体同基因骨髓单个核细胞经冠状动脉植入后，能够在受体移植心脏梗死区存活、分化、使梗死区出现心肌再生;心肌损伤后，可能激活了细胞因子级联，从而产生大量趋化因子或韶附分子使移植的骨髓单个核细胞定向迁移至梗死区。