【摘 要】
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人参(Panax ginseng C.A.Meyer)是我国传统的名贵中草药,为五加科多年生草本药用植物,具有非常高的药用价值和经济价值。东北是人参的重要产区,灰葡萄孢可以侵染人参叶片、叶柄、花和果实,严重时还会侵染人参的茎和根。目前,人参灰霉病已经成为影响人参产业持续健康发展的主要危害之一。BcGP基因编码谷氨酰胺转移酶,谷氨酰胺转移酶在自然界分布广泛,目前该酶主要来源是微生物,主要应用在食品工
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人参(Panax ginseng C.A.Meyer)是我国传统的名贵中草药,为五加科多年生草本药用植物,具有非常高的药用价值和经济价值。东北是人参的重要产区,灰葡萄孢可以侵染人参叶片、叶柄、花和果实,严重时还会侵染人参的茎和根。目前,人参灰霉病已经成为影响人参产业持续健康发展的主要危害之一。BcGP基因编码谷氨酰胺转移酶,谷氨酰胺转移酶在自然界分布广泛,目前该酶主要来源是微生物,主要应用在食品工业用于改善食品蛋白质结构,也有报道该酶与人类疾病相关(包括肿瘤、自身免疫疾病、皮肤病、神经退行疾病等),但目前未见有关该酶在灰葡萄孢致病过程中的作用的报道。本论文通过对BcGP基因研究,得到了如下结果:1、对BcGP基因进行了克隆和生物信息学分析,发现BcGP基因全长781 bp,含有三个外显子和两个内含子,其开放阅读框长681bp,编码226个氨基酸,有5个结构域,在进化上具有保守性。2、通过农杆菌介导的遗传转化的方法得到了BcGP基因的敲除突变体ΔBcGP和回补转化子ΔBcGP/GP,并通过相应的抗性筛选、PCR验证和qRT-PCR检测验证了敲除子和互补子。3、ΔBcGP的菌落生长速度略快于灰葡萄孢野生型B05.10的生长速度,对盐胁迫敏感,对刚果红和十二烷基硫酸钠不敏感,对H2O2的耐受性更强。4、与B05.10相比,ΔBcGP对人参、拟南芥(Arabidopsis thaliana)和菜豆(Phaseolus vulgaris)等植物叶片的致病力增强,表明BcGP基因对B05.10的致病性具有负调控作用。
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