noxa mRNA及其编码蛋白表达与非小细胞肺癌的相关性研究

来源 :昆明医学院 | 被引量 : 2次 | 上传用户:winchard
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目的探讨noxa mRNA及其功能蛋白表达与肺癌的相关性;肺癌组织中p53对noxa的调控关系。方法应用实时荧光定量RT-PC.R和免疫印迹法(Western Blot, WB)检测44例肺癌患者的癌组织、癌旁组织和远癌组织及10例肺良性病变组织中noxa mRNA及其编码蛋白的表达情况;应用WB检测p53编码蛋白的表达。其次,采用TUNEL检测其中20例肺癌患者的癌组织、癌旁组织和远癌组织的细胞凋亡状态。结果1.实时荧光定量RT-PCR检测noxa mRNA应用ABI公司的TaqMan通用PCR扩增预混试剂、特异性引物和探针的试验方案。反应体系为TaqMan通用PCR扩增体系12.5μl, Assays-on-demandTM基因表达试验分型试剂1.25u1(包含正向引物和反向引物以及TaqMan探针),cDNA 2.51μl,无核酸水8.75 u1,总体系25u1。内参GAPDH的扩增除引物和探针外,其他体系成分同上。扩增条件:50℃2 min;95℃10 min;95℃15 sec、60℃1 min,共40个循环。2.应用实时荧光定量RT-PCR检测noxa mRNA的表达noxa mRNA在癌组织、癌旁组、远癌组及肺良性病变组织中均有表达:癌组织0.52(0.31~0.80)、癌旁组织1.49(0.51~2.56)、远癌组织1.00(0.52~1.54)。经秩和检验分析,noxa mRNA的表达在同一病例的癌组织、癌旁组织和远癌组织之间差异有统计学意义(x2(H)=14.65,P<0.05),两两比较后,结果显示:noxa mRNA的表达在癌与癌旁、癌与远癌的差异均有统计学意义,而在癌旁组织和远癌组织之间的差异无统计学意义,提示癌旁组织和远癌组织之间noxa mRNA的表达差异不大,但均高于癌组织noxa mRNA的表达。而鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织、癌旁组织和远癌组织中noxa mRNA表达水平差异无统计学意义(x2(H)=1.446,p>0.05;F=0.976,p>0.05;F=3.082,P>0.05)。3.NOXA蛋白检测癌组织、癌旁组织及远癌组织的NOXA与GAPDH扫描面积的相对比值分别为0.77(0.40~1.59)、1.49(0.79~2.69)和1.40(0.75~1.98)。对肺癌癌组织、癌旁组织、远癌组织及肺良性病变组织的NOXA蛋白表达量进行秩和检验,结果显示:NOXA蛋白在各组之间的表达差别有统计学意义(x2(H)=23.211,P<0.05);进一步做组间两两比较,结果显示:NOXA蛋白表达在癌与癌旁、癌与远癌、癌与肺良性病变组织的差异均有统计学意义(F=9.064,P<0.05),而在癌旁组织、远癌组织及良性病变组织之间差异无统计学意义。鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织、癌旁组织和远癌组织中NOXA表达水平差异无统计学意义(x2(H)=1.137,P>0.05;x2(H)=0.000,P>0.05;x2(H)=1.054,P>0.05),表明NOXA表达水平与肺癌的病理类型无关。4.P53蛋白检测癌组织与癌旁组织、远癌组织和肺良性病变组织之间及癌旁组织与肺良性病变组织之间的p53蛋白表达差异有统计学意义,而其余各组间差异无统计学意义。5.TUNEL检测结果癌组织、癌旁组织和远癌组织A工分别是:4.96%±1.63%1.45%±0.46,1.26%±0.42%。癌组织的AI高于癌旁组织和远癌组织,AI差异有统计学意义,Z=3.920,p=0.000;同时癌旁组织与远癌组织之间AI的差异也有统计学意义,Z=-3.469,P=0.001。6.p53与NOXA关系分析NOXA蛋白表达与P53的蛋白表达之间没有直接关系,其可能的原因是由于肺癌患者P53的突变很高,突变的P53失去对NOXA的调控作用。结论noxa mRNA、蛋白表达在肺癌组织中是下调的,它可能是伴随肺癌发生和发展过程的一个重要因素,但mRNA和蛋白表达水平与肺癌的组织类型和病理类型无关;肺癌组织中NOXA和P53之间无相关性,提示本组研究对象中P53并没有介导NOXA的表达,可能是P53高突变的结果;癌组织中细胞凋亡增加,不是NOXA表达的结果,而可能是其他DNA损伤机制引起的。另外,本研究结果与在其他肿瘤组织的研究结果不尽一致,说明noxa在肿瘤的发生发展中,不同的组织有不同的表现,而在肿瘤发生发展中的作用机制还有待进一步的研究,是否能作为肿瘤诊断和治疗的新靶点还有待进一步的研究。
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