免疫层析定量测定AFP和RNA干扰K562细胞的研究

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恶性肿瘤作为严重危害人类生命健康的重大疾病,已经成为人类社会广泛关注的焦点。本论文就目前常见的两种恶性肿瘤,通过构建多功能的纳米材料,研究其在肿瘤诊断和治疗方面的应用。1、基于上转换发光免疫层析定量检测甲胎蛋白(AFP)的研究采用水热合成法,以油酸为稳定剂合成上转换发光材料(UCP)。通过对其表面修饰与活化实现与生物活性分子的连接,并将其与免疫层析技术相结合,建立了一种快速、简便的甲胎蛋白(AFP)定量检测技术。评价了该方法的灵敏度、特异性、准确度和精密性,并通过临床100例血清样本,探讨上转换发光技术与化学发光检测方法的一致性。结果显示,该方法能在20min内完成,检测灵敏度达5 ng/ml,应用于其它肿瘤标志物CEA、CA199、FER、AFU和NSE的检测,无交叉反应。准确度与精密度均符合临床要求。与化学发光技术相比一致性较好,决定系数R2=0.9908。2、多功能siRNA复合物的合成及其对K562细胞干扰的研究。采用Stober法合成核壳型的荧光纳米粒子SiO2/FITC,通过TEM、紫外、荧光等分析技术进行表征。利用正负电荷间的静电作用,对其表面进行聚乙烯亚胺(PEI)修饰,进而成功构建多功能siRNA复合物,并作用于K562细胞。结果表明制备的荧光纳米粒子SiO2/FITC单分散性好,荧光强度大、性能稳定。由此构建的siRNA-PEI/SiO2/FITC复合物可以成功有效地转染进入K562细胞,并显著降低bcr/abl融合基因mRNA水平。由此可见,荧光纳米粒子SiO2/FITC不仅能作为载体,成功将siRNA转导进入细胞,而且可以起到细胞标记作用,监测复合物的整个传送与作用过程,不失为一种用于分析RNAi功效的有效工具。该方法也为肿瘤的治疗提供了一种新的可能。
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